冻存ATCC细胞的复苏和培养

冻存ATCC细胞的复苏和培养
1、 先准备好细胞培养皿或细胞培养瓶，及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37°c水浴中预先温热细胞培养基
 
2、小心取出装有细胞的冻存管，保持管盖拧紧，将冻存管盖一下的部分置于37°C水浴中并轻微的搅拌以帮助解冻。解冻过程应该尽快，大约短于2分钟或待Z后一块小冰晶体刚融化，就应该将细胞冻存管取出水浴。
 
3、在从水浴中取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂，用于菌纸巾或纱布试干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下生物安全柜中严格操作。
 
4、小心拧干冻存管的顶部，将管内容物用1MI移枪转移到9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟（125*g）.小心吸去上清液以去除抗冻剂（二甲基亚砜），避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于配好的*培养基中。将细胞悬液转移到培养容器，轻轻摇晃使细胞均匀的分布。生长较慢的细胞株可重悬于5——8mI培养基并转移到T125培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12——20mI培养基并转移到T75培养瓶。
 
5、将细胞培养容器置于细胞培养箱，在温度37°C二氧化碳浓度5%的培养条件下进行卵育。细胞培养24小时候后应在显微镜下观察细胞形态和生长状况 。