细胞系特征的检测方法

细胞系检测方法主要包括以下几种：

1.光学显微镜和倒置显微镜

(1)未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。

(2)染色细胞：常用吉姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。

2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜

一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有：HO33342(Hoechst 33342)，HO33258(Hoechst 33258)和DAPI。这些染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料，储存液用蒸馏水配成1mg／ml的浓度，使用时用PBS稀释成终浓度为2～5mg／ml。DAPI为半通透性，储存液用蒸馏水配成1mg／ml的浓度，使用终浓度一般为0. 5～1mg／ml。

Hoechest 33258是膜透性的，因此在活细胞时候能轻松进入；DAPI是半透性的，有选择性地进入细胞。因此Hoechest 33258一般用来染活细胞，可以直接进入细胞；DAPI一般是染固定细胞。两者都可以用紫外线看，参见以下的激发发射波长：Hoechst 33258的Z大激发波长为346nm，Z大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，Z大激发波长为352nm，Z大发射波长为461nm。DAPI的Z大激发波长为340nm，Z大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，Z大激发波长为364nm，Z大发射波长为454nm。

吖啶橙是Z经典的灵敏的荧光染料，它可通过与DNA和RNA的连接碱基对和磷酸盐基团结合，使细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光。吖啶橙在稀溶液中呈绿色；在浓溶液中，由于出现二聚体和多聚体而呈现橙红色。由于DNA是高度聚合物，吸收荧光物质的位置较少，故发绿色荧光：而RNA聚合度低，能和荧光物质结合的位置多，故发红色荧光。在荧光显微镜下，细胞核DNA为黄绿色均匀荧光，细胞质和核仁的RNA为橘黄或橘红色荧光。出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色染色，或核染色呈新月形聚集于核膜一边；晚期可见黄绿色圆形小体，即凋亡小体。细胞坏死时，细胞质内黄绿色或橘黄色荧光均可减弱或消失。

结果评判：细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状或呈折缝样，部分染色质出现浓缩状态；aⅡ期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；bⅡ期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。

3.透射电子显微镜观察

凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期的细胞系核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象的空泡结构；Ⅱ期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。
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