原代细胞培养生存期的三个阶段

1. 原代细胞潜伏期（latent phase） ：

接种 经过 悬浮期（细胞质回缩,胞体呈圆球形） 贴壁。

初代培养细胞 经过 10～24小时或更多时间。

连续细胞系和癌细胞系 经过 10～30分钟 贴附。

贴附现象是一个非常复杂和受多种因素的影响。

影响细胞贴附：底物表面不干净，影响细胞贴附。

利于细胞贴附：底物表面带有阳性物质与特殊物质:

纤粘连蛋白（fibronectin FN）、

细胞表面蛋白（cell surface proteinCSP）
这些物质有的存在与细胞表面,有的来自血清。

潜伏期特点：

长短与细胞接种密度、种类、使用的培养基性质有关。

（1）细胞贴附后进入潜伏期,细胞无增殖。少见分裂相，细胞有运动活动。

（2）初代培养 细胞潜伏期约为24～96小时或更长，

连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期约6～24小时。

（3）细胞接种密度大潜伏期短。

（4）细胞出现分裂相增多时，标志细胞进入指数增生期。

2．指数增生期（logarithmic growth phase）：

特点：细胞增殖Z旺盛阶段,分裂相增多。

细胞分裂指数（mitotie index MI） ：

表示每1000个细胞中的分裂相数。

条件：分裂相数与细胞种类、培养成分、pH培养箱温度有关。

细胞分裂指数：

初代细胞：在0.1％～0.5％之间％ ,

连续分裂细胞和肿瘤细胞：3 ～5％ 

指数增生期是作为细胞一代活力的时期,是进行实验和Z主要的阶段。 

指数增生期持续3～5天，细胞数量增多后生长空间变小，细胞相互接触可连接成片。 

正常细胞：细胞相互接触能抑制细胞运动，这种现象称为接触抑制（contact inhibition）。 

肿瘤细胞：没有这种现象，可作为区别正常与肿瘤细胞的标志之一。当肿瘤细胞达到一定密度后向三维空间发展，使细胞发生堆积（piled up）。 

由于细胞不断增殖分裂，细胞数量持续增多，培养液的营养成分减少，代谢产物增多，细胞受营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制（Density inhibition）,导致细胞分裂停止。 

3.停滞期（stagnate phase） 

细胞量和密度达到饱和，细胞停滞增殖。表明细胞进入到停滞期,细胞数量持平，也称为平顶期（plateau）。 

特点：原代细胞不增殖,有代谢活动。培养液中的营养已逐渐耗尽,代谢产物积累增多,pH降低，此时需要传代,否则细胞将会中毒,发生形态改变,细胞会从底物脱落死亡。 

注意： 

传代过晚将影响下一代细胞的生长,至少要再传 1～2代 ,通过换液淘汰死细胞和受损较轻的细胞。待细胞全部恢复后再用。
*        100克    气单胞菌鉴别琼脂
*        100克    血琼脂基础2号
*        1公斤    液体硫乙醇酸盐培养基
*        100克    卵黄高盐琼脂基础
*    RT    25克    胰膘肉汤基础
*        25公斤    0.5%纯度葡萄糖肉汤培养基
*        40克    固体改良马丁琼脂培养基
*        500毫升    聚山梨酯80培养基（真菌）
*    RT    100克    改良沙氏琼脂培养基
原代细胞