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人正常组织来源细胞主要通过嵌在细胞膜上的蛋白质与环境相互作用,这代表了产生和解释细胞力的关键点。一些蛋白质会响应液体流动对其产生的“推力”,就像在血管中的情况;而另一些蛋白质在细胞被其邻近细胞拖拽或黏附到其他邻近蛋白质时,产生与张力相关的信号。
20 世纪 90 年代,牵引力显微镜(TFM)出现,成为*个真正可以定量测量这种力的工具。 例如,1999 年,当时供职于伍斯特麻省大学医学院的 Yu-Li Wang 和附近波士顿大学的 Micah Dembo,将一种称为成纤维细胞的结缔组织细胞铺在一种嵌入了荧光微珠的凝胶材料上。随后他们展示了可以使用 TFM,通过测量微珠的位移来推算出这些细胞产生的力。德国埃尔朗根 - 纽伦堡大学的生物物理学家 Ben Fabry 说:“这就像一个弹簧秤,你对弹簧秤施重并测量其变形程度,如果你知道弹簧的刚度,你就能确定力的大小。”
TFM 已经成为研究单个细胞和组织样互连细胞片层的标准方法。Clare Waterman 任职于马里兰州贝塞斯达的国家心脏肺血液研究所,她已经使用 TFM 来研究细胞迁移,该过程在一定程度上由被称为黏着斑的细胞结构将自身粘连在周围细胞外基质(ECM)上时所产生的力介导。
Waterman 小组开发出了相关方法来增加 TFM 实验可以成像的微珠数量,以便产生超高分辨率的力图。她说:“我们可以在每个黏着斑下设置 50 个标记物,所以我们可以达到亚微米级别的分辨率。”这使得她的小组能够揭示在黏着斑处产生的力,是如何触发在胚胎发育等过程中协调定向细胞运动的分子事件。
当然,微珠对细胞运动的响应是一个多维移动,这种多维移动比一维的弹簧秤变形要复杂得多。TFM Z初需要强大的超级计算机来解读数据,不过现代计算方法已经使该技术更易使用。即使如此,将微珠的位移数据转换成力的测量仍然具有挑战性,并且存在很多潜在的错误源。Waterman 说:“可能有一个单细胞在相反的方向拉,使它看起来基本上没有形变。而且当微珠的运动超出了细胞的边界,就将很难处理。”
其他研究团队正在将 TFM 扩展到三维,以更好地映射生物学上的实际情况。例如,Fabry 和他的同事开发了一种 TFM 方法,使用胶原蛋白构成的凝胶,在三维跟踪细胞力,胶原蛋白是 ECM 的一种关键的蛋白质成分。他的团队能够探测细胞产生的力、以及细胞通过一种合成的三维‘组织’时的速度和方向这几者之间的关系——有望为癌细胞的转移生长建模。
但他的方法也加大了对分析和计算的挑战。Fabry 说:“胶原蛋白是非常难处理的材料 — 它的行为是高度非线性的,也就是说,如果你稍微拉伸它一点,它是柔软的,但如果你多拉伸一点,它会突然变得非常僵硬。”
为了避开这个计算上的负担,新泽西州普林斯顿大学生物医学工程师 Celeste Nelson 在她的器官发育研究中采用了较低分辨率的数据。她说:“我们更关心的是在上百或上千人正常组织来源细胞的总数中找到力的大小的相对差异。然而,力的产生从根本上来说是动态的;需要在多个时间点收集这些三维数据,她说:“这样计算量自然会暴增。”
HPLC≥98% 比枯枯灵;毕灵碱;荷包牡丹碱 (+)-Bicuculline 20mg/支
HPLC≥98% 异槲皮苷 Isoquercitrin;Isoquercetin; Isoquercitroside 20mg/支
HPLC≥98% 乙酰紫堇灵; 乙酰紫堇醇灵碱 Acetylcorynoline 20mg/支
HPLC≥98% 三叶豆紫檀苷 Trifolirhizin;(-)-Maackiain-3-O-glucoside 20mg/支
HPLC≥98% 去氢二异丁香酚 Dehydrodiisoeugenol 20mg/支
HPLC≥98% 利卡灵-B;利卡灵B (-)-Licarin B 20mg/支
HPLC≥98% 肉豆蔻木脂素 Myrislignan 20mg/支
HPLC≥98% 泽泻醇B-23醋酸酯 Alisol B 23-acetate 20mg/支
HPLC≥98% 原花青素B2 Procyanidin B2 5mg/支
HPLC≥98% 人参皂苷F1 Ginsenoside F1 20mg/支
人正常组织来源细胞
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