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人或动物体内(或胚胎组织)由于多种肿瘤细胞结合紧密,不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖,即使采用1mm3的组织块,也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长,若需获取大量细胞,必须将现有的组织块充分散开,使细胞解离出来,常采用的方法如下:
一、悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,Z简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟,若悬液量大,可适当延长离心时间,但速度不能太高,延时也不能太长,以避免挤压或机械损伤细胞,离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次,用培养基洗一次后,调整适当细胞浓度后再分瓶培养,若选用悬液中某些细胞,常采用离心后的细胞分层液,因为,经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可根据需要收获目的细胞。不同比重的分层液的配制和具体分离方法详见淋巴细胞分离培养的章节。
二、实体组织材料的分离方法
对于实体组织材料,由于细胞间结合紧密,为了使组织中的细胞充分分散,形成细胞悬液,可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。
(一) 机械分散法
所取材料若纤维成分很少,如脑组织,部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内(用九号针),使细胞通过针头压出,或在不锈钢纱网内用钝物压挤(常用注射器钝端)使细胞从网孔中压挤出。此法分离细胞虽然简便、快速,但对组织机械损伤大,而且细胞分散效果差。此法仅适用于处理纤维成分少的软组织。
(二)消化分离法 组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状),应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使肿瘤细胞间的桥连结构松动,使团块膨松,由块状变成絮状,此时再采用机械
法,用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡,使细胞团块得以较充分的分散,制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液,接种培养后,细胞容易贴壁生长。
Gadodiamide 钆双胺标准品 131410-48-5 500mg
Clioquinol 氯碘羟喹标准品 130-26-7 500mg
Noscapine 那可丁标准品 128-62-1 500mg
Docusate Calcium
磺基丁二酸-1,4-二(2-乙基己基)酯钙盐标准品 128-49-4 500mg
Butylated Hydroxytoluene 丁羟甲苯标准品 128-37-0 500mg
Pyruvic Acid 丙酮酸标准品 127-17-3 500mg
Potassium Acetate (AS) 醋酸钾标准品 127-08-2 500mg
Sucrose Octaacetate 蔗糖八乙酸酯标准品 126-14-7 500mg
Prednisolone Sodium Phosphate 泼尼松龙磷酸钠标准品 125-02-0 500mg
Hydroquinone 氢醌标准品 123-31-9 500mg
肿瘤细胞
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