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细胞活性的检测方法的优劣势

时间:2018-9-7阅读:886
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      小鼠ELISA试剂盒细胞活性的定义具有多样性,通过对关键的细胞生理指标进行标记来进行检测,如细胞代谢的活性(酯酶的功能,MTT法)、凋亡标记物(Annexin V)、细胞氧化还原电位、膜电位、增值率(DNA含量)、线粒体功能和膜的完整性等。虽然有如此多的指标参数,但是基于对细胞膜的完整性和相关的染料排斥发检测,已经被广泛的认为是作为细胞活性检测的标准。应用广泛的细胞膜完整性的检测方法是台盼蓝染色法,该法早是基于显微镜下观测并且手工计数,过程费事费力,并且计数的系统误差较大。为了排除人工计数的误差,增加计数过程的准确性,出现了基于仪器放大、拍照计数的方法。这样提高了计数过程的自动化程度,但是依旧无法摆脱由于计数时焦平面的选择、颗粒识别的准确性问题,并且容易高估细胞活性。为了解决这些问题,一些荧光染料被发明进行使用。该法能够较台盼蓝染色提高100倍或者更高的检测准确性与灵敏度。这类型的荧光染料中,碘化丙啶(Propidium Iodidi,PI)是应用广泛的一种标准染料。

      与其他基于荧光染料标记的实验一样,该法的缺点就是需要使用荧光显微镜或者是流式细胞仪。前者要求配置一套荧光显微镜,相对应的激发光源以及滤光片,并且操作过程依旧是手工操作,人工计算实验结果,过程耗时还无法避免人为的主观因素。而流式细胞仪能够准确的计数,并且进行统计学分析,但是设备昂贵,需要有经验的实验人员进行专门操作,以及需要一定的设备维护等问题。

      Orflo公司创新性的出了台便携的流式检测系统,能够提供高精度的PI活性检测的实验数据,仪器无需预热,无需清洁与维护,检测快速,不需要专门的仪器操作人员和相关背景知识的人员。Moxi Flow是世界上台结合库尔特原理(颗粒计数和粒径分析)和单荧光通道(PMT)检测的便携流式。本文中将对几种不同的细胞活性检测方法进行比较。

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