梨火疫病PCR试剂盒 返回列表页

服务流程：

公司产品仅用于科研接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

PCR反应的特异性决定因素为：

①引物与模板DNA特异正确的结合；

②碱基配对原则；

③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

④靶基因的特异性与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

(2) 灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

(4) 对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

人泛素结合酶E2A(UBE2A)  1,6-二磷酸果糖三钠盐(98-101.0%，BR)卷曲螺旋结构域蛋白116抗体

人胞外超氧化物歧化酶(SOD3)1,6-二磷酸果糖三钠盐(98-101.0%，BR)卷曲螺旋结构域蛋白117抗体

人癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1) 铵(>99%，BR)卷曲螺旋结构域蛋白127抗体

人II D组磷脂酶A2(PLA2G2D)四甲基对苯二(>99%，BR)卷曲螺旋结构域蛋白138抗体

人II A组磷脂酶A2(PLA2G2A)1,3,5-三羟基苯二水合物(>98%，BR)卷曲螺旋结构域蛋白144NL抗体

人泛素关联蛋白2 (UBAP2)碳酸无水(>98%，BR)转录同源蛋白质CUX2抗体

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)牛磺酸(>98.5%，JP )卷曲螺旋结构域蛋白146抗体

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)草酸铵(98~101%,BR)卷曲螺旋结构域蛋白147抗体

人泛素特异性肽酶8 (USP8)二苯(BC)卷曲螺旋结构域蛋白158抗体

人二肽基肽酶VI (DPP6) 乙二四乙酸铜二钠盐(>98%,BR)钙粘附蛋白-11抗体

人甘露糖受体C2 (MRC2) 5'-单磷酸腺苷(>95%，BR)核仁蛋白C23抗体

人甘露糖受体C1(MRC1) 硫酸铝十六水(>98%,BR)皮肤相互作用蛋白2抗体

人甘露糖受体C1样蛋白1(MRC1) 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，硫酸铵悬浮液1号染色体开放阅读框149抗体

人谷氨酸脱羧酶样蛋白1(GADL1) 苹果酸脱氢酶(>12,000U/ml，BC)碳水化合物激酶结构域蛋白质抗体

人谷氨酸脱羧酶1(GAD1)N-羟基丁二酰亚(>98%,BR)尾侧型同源转录因子1抗体

人过氧化物酶体生物合成因子2 (PEX2)没食子酸一水物(标准品)补体C1qTNF8链多肽抗体
梨火疫病PCR试剂盒phospho-ERK1(Thr197/Thr202)  磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2抗体丁酸酯 98%

Eph receptor B2/Ephb2   Ephb2抗体软脂酸 standard for GC, ≥99% (GC)

ERK1/MAPK3  丝裂原活化蛋白激酶3抗体软脂酸 AR

MAPK4  丝裂原活化蛋白激酶4抗体软脂酸 CP

DUSP1/MKP-1  丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗体软脂酸 分析标准品，>99%(GC)

Phospho-MKP1 (Ser359)  磷酸化丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗体软脂酸 97%

Phospho-MKP1 (Ser296 + Ser318)  磷酸化丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗体软脂酸 99%

MKP-2/DUSP4  丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-2抗体正戊 GR,99%
反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。