猪瘟病毒疫苗株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 返回列表页

服务流程：

公司产品仅用于科研接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

PCR反应的特异性决定因素为：

①引物与模板DNA特异正确的结合；

②碱基配对原则；

③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

④靶基因的特异性与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

(2) 灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

(4) 对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

猪三叶因子2(TFF2)双十二烷二溴化铵胃泌素抑制肽受体抗体

猪性别决定区Y框蛋白3(SOX3)L-赖氨酸粒-巨噬集落激因子受体α抗体

猪补体成分2(C2)  L-赖氨酸谷胱甘肽硫转移酶pi因抗体

猪免疫球蛋白G Fc段低亲和力受体IIIa(FcγR3A) L-色氨酸接头蛋白Gab 2抗体

猪过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)L-色氨酸(标准品)葡萄糖6磷酸酶α/G6Pase-α抗体

猪信号传导转录激活因子3(STAT3)L-丝氨酸糖磷脂酰肌抗体

猪Bκ 轻肽因增强子核因子抑制因子ε(Nfkbie) L-丝氨酸(标准品)二酶1抗体

猪尿素酶相关蛋白C(UreC) L-精氨酸(标准品）核呼吸因子2抗体

猪N端中段骨钙素(N-MID-OT)L-精氨酸肿瘤转移抑制因GDIA1抗体

猪生长分化因子15(GDF15)L-精氨酸盐酸盐肿瘤转移抑制因GDIA2抗体

猪血清/糖皮质激素调节激酶2(SGK2)DL-精氨酸胰高血糖素抗体

猪糖链抗原19-9(CA19-9)  L-缬氨酸线粒体甘油3磷酸酰转移酶抗体

猪F-框蛋白2(FBXO2)  L-异亮氨酸(标准品)磷脂酰蛋白聚糖-6抗体

猪TGF-β诱导早期应答因1(TIEG1) L-异亮氨酸磷酸二羟酮酰转移酶抗体

猪维生素D结合蛋白(DBP)L-苏氨酸囊性组织液体蛋白15抗体

猪纤维蛋白原降解产物(FDP) DL-苏氨酸磷酸化接头蛋白Gab2抗体
猪瘟病毒疫苗株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒Skp2   S相激酶相关蛋白抗体直接黑38 Dye content，≥45 %

SLC4A4  碳酸氢钠协同转运蛋白4-A4抗体3,4-二氯 98%

Slc4a7/Nbcn1  碳酸氢钠协同转运蛋白4-A7抗体邻二 AR，98%

NGALR/Slc22A17  可溶性载质转运蛋白22A17抗体邻二 99%，用于生化研究

SLC24A5  可溶性载质转运蛋白SLC24A5抗体邻二（OPD） 99.5%

Slc26a5  Slc26a5抗体对二 AR，97%

SLC6A19  依赖钠钙交换蛋白6间二 99%

SLC16A3/MCT-4  MCT4抗体间二 99.5%