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乳糖/半乳糖检测试剂盒
【原理】
乳糖+H2O —β-半乳糖苷酶→D-葡萄糖+D-半乳糖
D-半乳糖+NAD+—β-Gal-DH→D-半乳糖酸+NADPH++H+
【测定条件及检测步骤】
波 长:340 nm
比 色 杯:1.00㎝ (玻璃或塑料)
温 度:20~37 ℃
测 定 时:以水或空气校准;
样品溶液:样品中乳糖+半乳糖的浓度为0.1-1 g/l
准 确 率:在给定条件下,质控溶液变异在5 %
| 乳糖 | 半乳糖 | ||
| 空白 | 样品 | 空白 | 样品 |
R1 | 200 | 200 | 200 | 200 |
R2 | 50 | 50 | -- | -- |
样品 | -- | 100 | -- | 100 |
混合均匀并反应20mn | ||||
R3 | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
蒸馏水 | 2000 | 1900 | 2050 | 1950 |
混合,读取吸光度值 | A1 | A1 | A1 | A1 |
R4 | 50 | 50 | 50 | 50 |
混合均匀, 反应30mn后读吸光度值 | A2 | A2 | A2 | A2 |
【计算】
半乳糖测试:
ΔA半乳糖= (A2 ―A1)样品―(A2―A1)空白
乳糖测试:
ΔA乳糖+半乳糖= (A2 ―A1)样品―(A2―A1)空白
所以:
ΔA乳糖=ΔA乳糖+半乳糖―ΔA半乳糖
C = (V×MW×ΔA) / (ε×l×v×1000) [g/l]
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