安捷伦液相色谱仪HPLC的日常维护及保养及使用方法

安捷伦液相色谱仪HPLC的日常维护及保养　　1、手动进样器：　　平时应该注意使用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗；如果出现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般要申请维修或更换配件。　　2、排液阀：　　此处不能密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。　　3、单向阀：　　如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗！　　4、工作站：　　出现死机可重起计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。　　5、过滤器：安捷伦液相色谱仪　　当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染， 拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。　　6、吸滤头：　　特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换。　　7、流动相的抽作要求：　　液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤；　　流动相脱气至关重要(可采用抽滤，超声波脱气等方法)　　8、流通池：　　在色谱峰不正常时会可能是此部件补污染。可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗(可根据说明书进行操作或申请维修)。　　9、泵头：　　泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等)　　泵压不稳：　　1、泵头有气泡——流动相脱气/大流量冲洗泵/用注射器抽取流动动相　　2、单向阀故障——清洗　　若上述操作仍不能解决，可用异丙醇冲洗流动(无色谱柱冲洗，由手动进样器直接进检测器)，流量为3-4ml/min，冲洗50分钟左右，然后重新安装色谱柱，更换流动相平衡，如此再不能解决泵压波动故障，可申请更换配件。　　10.漏液处理：　　C18柱不能进蛋白样品、血样，生物样品。　　要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。　　长时间不用仪器，应该将柱子取上用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇)保存，因为纯水易长霉。　　流路堵塞问题：堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查，并清洗。清洗方法：①以民丙醇作溶剂冲洗②放在异丙醇中超声波清洗③用10%稀硝酸清洗　　11.缓冲盐的使用：　　流动相含有盐分时，做完实验后一定要进行流路冲洗；　　首先用水冲洗，打开排液阀用PURG键转换出原有含盐的流动相，然后关闭排液阀打开泵冲洗全部流路45分钟以上，如此更换流动相为水和甲醇混合液冲洗全部流路30分钟(此步骤一般可省去，根据实验而论)，zui后更换纯甲醇冲洗全部流路45分钟以上。　　12.泵头冲洗；安捷伦液相色谱仪　　用备件中的针头和针管分别用蒸馏水和纯甲醇冲洗3-5ml。　　如流动相不含盐，可对机器定期进行简单的冲洗维护，根据实验多少而定。　　手动进样器冲洗；　　同样用备件中的针管和专用冲洗针头对手动进样器的装载状态和进样状态分别进行冲洗3-4ml的蒸馏水，然后再冲洗3-4ml的纯甲醇。确保每次做完实验，所有流路中充满纯甲醇！ 这样操作能够延长液相色谱柱使用寿命

　　液相色谱柱都是按照严格的标准生产和测试的，如能按照以下信息使用和维护色谱柱，不但能得到更佳的检测结果，更能够延长色谱柱的使用寿命。

　　色谱柱的安装：

　　1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。

　　2、为了使色谱柱与仪器系统达的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。

　　3、使用PEEK材料的通用接头，只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。

　　流动相平衡：

　　1、在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。

　　2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡）。

　　3、流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。

　　样品制备与操作：

　　1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。

　　2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。

　　3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。为获得分离效果，使用时请不要超过200kgf，而且避免压力突然上升或变化，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外操作温度不要超过60℃。

　　保存色谱柱：

　　1、如果流动相含有酸或无机盐，应当先用去离子水（20倍柱体积）冲洗干净。然后用用100％乙腈或甲醇保存色谱柱。最后用柱子的接头密封，并放在稳定的环境中存放。

　　2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落，避免造成色谱柱性能的降低。

　　色谱柱的再生：

　　1、用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱子，建议按柱子的箭头方向冲洗，尽可能不反冲：冲洗时使用的的参考溶剂顺序是水、甲醇、氯仿、异丙醇、甲醇。