小鼠孕酮(P)酶联免疫分析试剂盒使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中孕酮(P)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠孕酮(P)水平。用纯化的小鼠孕酮(P)抗体包
被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入孕酮(P)，再与HRP标记的孕酮(P)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的孕酮(P)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中小鼠孕酮(P)浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(1600ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
小鼠孕酮(P)酶联免疫分析试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
800ng/L 5 号标准品 150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
400ng/L 4 号标准品 150µl的5 号标准品加入150µl标准品稀释液
200ng/L 3 号标准品 150µl的4 号标准品加入150µl标准品稀释液
100ng/L 2 号标准品 150µl的3 号标准品加入150µl标准品稀释液
50ng/L 1 号标准品 150µl的2 号标准品加入150µl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同) 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50µl， 待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式， 将样品的OD值代入方程式， 计算出样品浓度， 再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值) ，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5) 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存： ；2-8℃。
2．小鼠孕酮(P)酶联免疫分析试剂盒有效期：6个月
