ELISA试剂盒酶符号抗体办法主要有两种：戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法。
1、戊二醛交联法戊二醛是一种双功用团试剂，它可以使酶与蛋白质的氨基经过它而联接。碱性磷酸一般用此法进行符号。交联办法分一步法、两步法两种。在一步法中戊二醛直接加入酶与抗体的混合物中，反响后既得酶符号抗体。
Elisa试剂盒中常用的酶一般都用此法交联。它具有操作简洁、有用（结合率达60%~70%）和重复性好等长处。缺陷是交联反响是随机的，酶与抗体交联时分子间的份额不严厉，结合物的巨细也不均一，酶与酶，抗体与抗体之间也有可能交联，影响作用。在两步法中，先将酶与戊二醛作用，透析除掉剩余的戊二醛后，再与抗体作用而构成酶标抗体。也可先将抗体与戊二醛作用，再与酶联合。两步法的产品中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的份额结合的，较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以进步敏感度，但其偶联的有用率较一步法低。
2、过碘酸盐氧化法
ELISA试剂盒本法只适用于含糖量较高的酶。辣根过氧化物酶的符号常用此法。反响时，过碘酸钠将HRP分子外表的多糖氧化为醛基很生动，可与蛋白质上的氨基构成Schiff氏碱而结合。酶符号物按克分子份额联合，其份额为：酶：抗体=1~2：1。此法简洁有用，一般以为是HRPzui可取的符号办法，但也有人以为所有试剂较为强烈，各批实验成果不易重演。
ELISA试剂盒按以上办法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和抗体。理论上，结合物中混有的游离酶一般不影响Elisa试剂盒中zui后的酶活性测定，因经过*洗刷，游离酶可被除掉，并不影响终究的显色。但游离的抗体则不同，它会与酶标抗体竞赛相应的固相抗原，然后减少了断合到固相上的酶标抗体的
量。因而制备的酶结合物应予纯化，去除游离的酶和抗体后用于检测，作用更好。、结合物制得后，在用作Elisa试剂盒前需要断定其恰当的作业浓度。运用过浓的结合物，既不经济，又可使本底增高；结合物的浓度过低，则又影响检测的敏感性。所以有必要对结合物的浓度予以挑选。zui适的作业浓度就是指结合物稀释至必定浓度时，能维护一个低的本底，并获得测定的灵敏度，到达zui合适的测定条件和测定费用的节约。就酶标抗体自身而言，它的有用作业浓度是指与其相应抗原包被的载体作实验时，能得到阳性反响的zui高稀释度。
