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阅读:107发布时间:2017-8-21
ELISA试剂盒: 在搜集样本前都有必要有一个完整的方案,有必要清楚要检测的成份是否满足安稳。对搜集后当天就进行 检测的样本,及时储存在4℃备用。关于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,-70℃冻存备用。标本应防止重复冻融。
液体类标本: 包含血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培育上清等。
1. 血清:ELISA试剂盒室温血液天然凝结10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉积构成,应再次离心。 2. 血浆: 应根据标本的要求挑选EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
3. 尿液 用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉积构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实施。
4. 细胞培育上清:检测排泄性的成份时,用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。
5. 培育细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。经过重复冻融或参加安排蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
6. 安排标本:切开标本后,称取分量。参加一定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷冻保存备用。标本融化后依然坚持2-8℃的温度。参加一定量的PBS(PH7.4),或安排蛋白萃取试剂, 用手艺或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。分装后一份待检测,其他冷冻备用。
ELISA试剂盒是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技能。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每参加一种试剂孵育后,可经过洗刷除掉剩余的游离反应物,从而确保实验成果的特异性与安稳性。在实际应用中,经过不同的规划,具体的办法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。
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