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阅读:102发布时间:2017-11-27
我们知道,ELISA试剂盒可分为多种类型测定,是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫剖析技能。
我公司技能部将各种ELISA常用办法的优势下风进行比照,成果如下:
一、直接法(direct Elisa)
将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。
1.优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响。
2.下风:试验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对进步。
二、间接法(indirect Elisa)
此测定办法与直接法相似,不同在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
1.优势:二抗能够加强信号,并且有多种选择能做不同的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它zui多的免疫反响性。
2.下风:交互反响发作的机率较高。
三、双抗体夹心法(sandwich Elisa)
被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选取,才可防止交互反响或竞赛相同的抗原结合部位。
1.优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。
2.下风:抗原必定得具有两个以上的抗体结合部位。
四、竞赛法(competitive Elisa)
样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一同竞赛相同的抗体,当样品里的自在抗原越多,就能够结合越多的抗体,而固定抗原就只能结合到较少的抗体,反之亦然。经清洗过程,洗去自在抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只有固定抗原的对照组成果相比较,依据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。
1.优势:可适用比较不纯的样本,并且数据再现性很高。
2.下风:全体的敏感性和专一性都较差。
五、ELISA试剂盒技能:根据细胞法(cell-based Elisa)
是一种新的定性蛋白检测技能,将细胞直接在微孔板里培育,待检测时,不需抽提蛋白和裂解细胞,便可直接丈量微孔板里蛋白经影响或抑制作用后的改变。
1.优势:无需裂解细胞,所以目标蛋白丢失zui少,可测定完好细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。
2.下风:不能测定抗原量。
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