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ELISA中阴性本底的构成原因

阅读:111发布时间:2017-6-1

ELISA试剂盒多年的销售经验使我们更加了解产品。今天我们就谈ELISA中阴性本底的形成原因。酶联固相免疫实验中,尤其在简介ELISA法中,经常会碰到阴性本底的问题。主要是本底过高和不同标本的本底值差异较大。本底或称背景,是ELISA中的非特异性显色。底物未经过酶作用而呈现的颜色称为空白。底物液如配制不当会出现一定的空白值。这个空白值只要不太高(A<0.05),可从个测定值中减除,并不影响实验结果。这里研究的是不含待测抗原或抗体的阴性标本在ELISA中出现的本底。从理论上讲,只有阳性标本zui终才能引出显色反应,在以下情况会出现本底。
在酶免疫测定中,ELISA试剂盒的特点是利用固相载体作为分离游离和结合的酶结合物的手段。固相载体与吸附在其上的抗原会抗体形成固相抗原或固相抗体,即免疫吸附剂。通常所用的固相载体聚苯乙烯其表面主要是疏水基团,通过疏水键与蛋白质结合。之中吸附式物理性的非特异性吸附,虽然蛋白质的分子量、等电点、浓度等对吸附的量有一定的影响,但总的来说各种蛋白质均能吸附在聚苯乙烯载体的表面。因此除在包被时有目的地使抗原或抗体吸附在载体上,在ELISA各个步骤中均有可能发生干扰物质的吸附,使zui终产生与受检抗原-抗体反应无关的显色,这是形成本底的主要原因。
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