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阅读:92发布时间:2017-6-5
ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的使用,但操作中的各个环节对实验的检查作用影响较大,如不留意,有也许致使显色不全、花板等成果。
将操作中各个环节常出现问题的因素及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启示,进步实验质量。
下面剖析Elisa实验操作中也许影响成果的因素,并给出相应的解决办法一、挑选试剂
挑选质量的检查试剂,严厉依照试剂阐明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
二、加样
也许因素:
1)血清或血浆标本别离欠好即进行加样; 2)手工操作中,加样板过多形成加样后放入孵箱前等待时刻过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅起孔外。
解决办法:
1)ELISA试剂盒标本为血清:将血液先天然寄存1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:有必要使用含抗凝剂的血液标本搜集管,采血后有必要立即倒置*混合5-10次,放置一段时刻后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检查,可放在2-8℃冰箱中,若要储存,则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板外表轻拭吸干。 4) 假如选用AT或别的全自动加样,挑选FAME或别的后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时,请分批操作。
三、 孵育
也许因素:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸腾,吸附于孔壁,难于清洁*; 2) 孵育时刻人为延伸,致使非特异性紧附于反响孔周围,难以清洁*。
解决办法:
1) 贴封片或加盖; 2) 按阐明步骤严厉控制操作时刻。
四、洗板
也许因素:
1) 选用手工洗板,孔与孔之间液体穿插。 2) 选用半自动洗板机洗板时,洗液量缺乏,致使洗板不*;洗板针阻塞,抽吸不*;洗板不畅,致使洗板作用差。 3) 反响板过多形成洗板等待时刻长。
解决办法:
1)ELISA试剂盒保证洗液注满各孔,洗板针疏通,洗完板后在吸水纸(挑选洁净、无或少尘的吸水资料)上轻轻拍干; 2) 合理安排,或多用几台洗板机。
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