1.ELISA试剂盒包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反响孔中加0.1ml，4℃ 。次日，弃去孔内溶液，用洗刷缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗刷，下同）。
2. 加样：加必定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反响孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗刷。（一起做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反响孔中，参加新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗刷。
4. 加底物液显色：于各反响孔中参加暂时制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反响：于各反响孔中参加2M硫酸0.05ml。
6. 成果断定：可于白色布景上，直接用肉眼调查成果：反响孔内色彩越深，阳性程度越强，阴性反响为无色或极浅，根据所呈色彩的深浅，以“+"、“-"号表明。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规则的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
ELISA试剂盒间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；
2.次日洗刷3次；
3.加必定稀释的待检样品（不知道抗体）0.1ml于上述已包被之反响孔中,置37℃孵育1小时,洗刷；
4.（一起做空白、阴性及阳性孔对照）于反响孔中，参加新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗刷；
6.ELISA试剂盒zui终一遍用DDW洗刷。
其余过程同“双抗体夹心法"的4、5、6。
