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ELISA试剂盒试验具体操作过程和注意事项

阅读:254发布时间:2017-7-5

ELISA试剂盒试验前预备:
1、运用前应将盒内各试剂取出,室温放置zui少30分钟。
2、预备各种试验仪器及资料,如微量移液器,吸头,医用蒸馏水等。
3、浓缩洗液与医用蒸馏水1:19倍稀释后变成运用洗刷液。
4、浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1:4倍稀释成运用样品稀释液。
5、用运用样品稀释液来稀释样品,按照1:100的体积比来稀释样品如10μl的样品参加到1ml的运用样品稀释液中,充分混匀待用。
ELISA试剂盒操作过程:
1、取出酶标板,设空白孔,按照次第对应别离参加100μl的规范品于空白微孔中(空白孔视为0号规范品,用医用蒸馏水代替);
2、别离符号样品编号,参加100μl的稀释样品于空白微孔中(不一样的样本选用不一样的吸头);
3、将酶标板置于37℃温育30分钟;
4、将酶标板板取出,将其间的液体甩去,每个孔中悉数加满运用洗刷液后,当即甩去液体;
5、每个孔中加满运用洗刷液后,细微振摇酶标板30秒后将孔中的运用洗刷液甩去,在吸水纸大将酶标板拍干;
6、重复第5个过程5次,在吸水纸大将酶标板拍干;
7、在规范品孔和样品孔中参加100μl的酶标巧合溶液;
8、将96孔板置于37℃温育30分钟;
9、将酶标板取出,将其间的液体甩去,每个孔中悉数加满运用洗刷液后,当即甩去液体;
10、每个孔中再次加满洗刷运用液后,室温细微振摇酶标板30秒后将孔中的运用洗刷液甩去,在吸水纸大将酶标板拍干;
11、重复第5个过程5次,在吸水纸大将酶标板拍干;
12、在每个孔中参加底物A 50μl后当即参加底物B 50μl。悄悄振动混匀。(A液、B液选用不一样的吸头加样);
13、将酶标板置于37℃避光温育反响15分钟;
14、每个微孔中参加50μl的停止液,悄悄振动混匀;
15、在酶标仪上,450nm处测定OD; 显色后,15分钟内进行测定;
16、根据制备的规范曲线,核算样本含量。
ELISA试剂盒留意事项:
1、此试剂为体外检查试剂,效期内运用,试剂应视为感染物,不一样总批号的试剂不能混用。
2、运用前应将盒内各试剂取出。室温放置zui少30分钟,
3、浓缩洗刷液呈现结晶后,请于37℃孵育15分钟。
4、浓缩样品稀释液呈现结晶后,请于37℃孵育15分钟
5、若24小时内进行试验,标本可存放于2~8℃。不需及时试验,标本-20℃保留,防止重复冻融。
6、在重复清洗微孔板,并扣干微孔中的剩余液体,否则将降低度,形成吸光度偏离的假像。
7、加样结束后,应留意细微摇动微孔反响条,以便使孔中的液体充分混匀。
8、试剂盒保留于2~8℃,请勿冷冻,有效期请见盒内标明。

 


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