双抗体夹心法检测抗原
双抗体夹心法是检测抗原zui常用的办法，但要留意的是在一步法（待测抗原与酶标抗体一同参加反响）测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原别离和固相抗体及酶标抗体，而不再构成“夹心复合物”呈现钩状效应，乃至可不显色而呈现假阴性成果。因而在使用一步法试剂测定标本中含量可反常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应留意可测规模的zui高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。 双抗体夹心法测抗原的另一留意点是类风湿因子（RF）的搅扰。RF是一种本身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充任抗原成份，一起与固相抗体和酶标抗体，表现出假阳性反响。双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能构成两位点夹心。
双抗体夹心法的扼要操作步骤为：
1）先参加抗体，使抗体固定于载体外表；
2）再加样品，使方针检测抗原构成抗原-抗体复合物；
3）加酶标抗抗体（第二种动物抗抗原的酶标抗体）；
4）参加酶促反响底物，发作显色反响，显色的深浅与待测抗原的量成正比。
竞赛法检测抗原
当小分子抗原或半抗原因缺少可作夹心法的两个以上的抗体位点，因而不能用双抗体夹心法进行测定，能够选用竞赛法形式。办法的基本原理可见图2，经洗刷后分红两组：一组加酶符号抗原和被测抗原的混合液，而另一组只加酶符号抗原，再经孵育洗刷后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为所要测定的不知道抗原的量。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
竞赛法的扼要操作步骤：
1）先参加抗体，使抗体固定于载体外表；
2）参加梯度浓度份额的待测样品与酶标抗原混合物,一起做只加酶标抗原的对照组；
3）参加酶促反响底物，发作显色反响，比照实验组及对照组的显色区别，核算不知道抗原的量。
双抗原夹心法检测抗体
双抗原夹心法的反响形式与双抗体夹心法相似。用特异性抗原进行包被和制备酶物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不一样之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因而其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常选用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不一样，寻觅适宜的符号办法。
双抗原夹心法的扼要操作步骤为：
1）先参加抗原，使抗体固定于载体外表；
2）再加样品，使方针检测抗体构成抗原-抗体复合物；
3）加酶标抗原；
4）参加酶促反响底物，发作显色反响，显色的深浅与待测抗体的量成正比。
间接法检测抗体
间接法是检测抗体常用的办法。其原理为利用酶符号的抗抗体（辣根过氧化物酶符号的兔抗*抗体）以检测与固相抗原的受检抗体（*），故称为间接法。本法首要用于对病原体抗体的检测而进行流行症的确诊。间接法的长处是只需改换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体树立检测相应抗体的办法。
间接法的扼要操作步骤：
1）将特异性抗原与固相载体联合，构成固相抗原；
2）加稀释的受检血清，保温反响。血清中的特异抗体与固相抗原，构成固相抗原抗-体复合物；
3）加酶标抗抗体；
4）参加酶促反响底物，发作显色反响，显色的深浅与待测抗体的量成正比。
竞赛法检测抗体
竞赛法测抗体的反响形式与竞赛法测抗原相似。用特异性抗原进行包被和制备酶物，以检测相应的抗体。当抗原材料中的搅扰物质不易除掉，或不易得到满足的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞赛与固相抗原。标本中抗体量越多，在固相上的酶标抗体愈少，因而阳性反响呈色浅于阴性反响。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。竞赛法测抗体有多种形式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞赛，抗HBc ELISA通常选用此法。另一种形式为将标本与抗原一同参加到固相抗体中进行竞赛，洗刷后再参加酶标抗体，与在固相上的抗原反响。抗HBe的检测通常选用此法。
竞赛法的扼要操作步骤：
1）先参加特异性抗原，使抗原固定于载体外表；
2）参加梯度浓度份额的待测样品与酶标抗体混合物，并做只加酶标抗体的对照组；
3）参加酶促反响底物，发作显色反响，比照实验组及对照组的显色区别，核算不知道抗体的量。
捕获包被法检测抗体
捕获包被法（亦称反向间接法）ELISA，首要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。以现在zui常用的IgM测定为例，因血清中对于某种抗原的特异性IgM和IgG一起存在，则后者可搅扰IgM的测定。因而先将一切血清IgM（包含异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去掉IgG后再测定特异性IgM。IgM抗体的检测用于流行症的前期确诊中。先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM（其间包含对于抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）。然后参加抗原，此抗原仅与特异性IgM相。继而加酶符号对于抗原的特异性抗体。再与底物作用，呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的前期确诊。类风湿因子（RF）相同能搅扰捕获包被法测定IgM抗体，致使假阳性反响。因而中和IgG的间接法近期颇受喜爱，用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。
捕获法测抗体的扼要操作步骤：
1）特异性捕获抗体的包被，先把能特异性待测抗原的抗体固定于固相载体外表；
2）参加待测样品，通过固定在载体外表的对于该抗原的抗体固定于载体外表；
3）参加特异性抗原以及对于该特异性抗原的酶标抗体；
4）参加酶促反响底物，发作显色反响，显色的深浅与待测抗体的量成正比。
ABS-ELISA法
除以上6种ELISA测试办法外，近年在亲和素-*体系上又发展出ABS-ELISA法 。亲和素是一种糖蛋白，每个分子由4个能和*的亚基构成，*为小分子化合物。用化学办法制成的衍*-羟基琥珀酰亚胺酯可与抗体或酶构成*符号产品，符号办法较为简洁，并且不影响抗体或酶原有的生物学活性。亲和素*体系，简称ABS（avidin-biotin system）。由于亲和素与*间的亲和力*，敏捷，且极其安稳，使BAS符号技能比常规酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技能有着更高的灵敏度，为微量抗原、抗体的检测开辟了新的路径，大大提高了检测的灵敏度，但该办法比一般ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，因而在临床检验中ABS-ELISA使用不多。ABS-ELISA法可分为酶符号亲和素-*（LAB）法和桥联亲和素-*（ABC）法两种类型。两者均以*符号的抗体（或抗原）代替原ELISA体系中的酶标抗体（抗原）。
在LAB法中，将特异性抗体*化、酶分子符号在亲和素分子上，*化抗体与被检抗原后，再借BAS的高度亲和力将酶分子联合到抗原分子上，经酶促反响即可检出抗原，因而提高检测的敏感度。
ABC法相同将特异性抗体*化、酶分子标在*上，亲和素和酶标*需求先按一定份额构成ABC复合物，这种网络结构了很多的酶分子，当亲和素尚未被酶标*饱满时，*化抗体即可与之, 使被检抗原、*化抗体和酶标*联成一体。
