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技术文章

多种类型的ELISA试剂盒

阅读:524发布时间:2017-9-25

试验类型
ELISA试剂盒有多种类型,不过它们都有一个一起特色,就是进行抗原捕获。一般捕获方式包含将抗原吸附到微孔板或许用微孔板上的抗体进行捕获。
一般人们运用双抗夹心法进行ELISA试验,双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体之间,这种方法既活络又有用,受到了许多研究者的喜爱。不过有时候双抗夹心法并不是好的挑选,例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着,又或许抗体只要一个抗体结合位点。
在上述情况下,竞赛性ELISA就更为适用,这种方法是选用带符号的纯化抗原与样本中无符号的抗原进行竞赛,以结合捕获抗体。

 

检测方式
现在检测ELISA试剂盒有许多途径,我们能够依据自己的偏好进行挑选。一般ELISA检测的是酶促反响的可溶性产物,抗体上结合有相应的酶(例如一般运用的辣根过氧化物酶HRP),而反响系统中添加有相应的底物(如3,3-二氨基联苯胺DAB)。
这种酶促反响生成具有特征性的色彩,能够通过分光光度计进行检测,碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶能够结合在一抗上,也能够结合在二抗上,还能够运用链霉亲和素符号的酶与亲和素符号的一抗结合。此外ELISA的成果检测还包含放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。

 

抗体类型
单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA,实际上有时候二者结合效果更好。例如,关于双抗夹心法而言,用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有协助。多抗能够保证捕获一切抗原,随后单抗再特异性检测具有特定抗原表位的抗原。
双抗夹心法ELISA中捕获抗体与检测抗体(不管多抗仍是单抗)的配对很有考究。我们不期望捕获抗体与检测抗体竞赛抗原上的同一位点,为此我们就需求保证捕获抗体和检测抗体所辨认的抗原表位不存在重叠。
如果捕获抗体和检测抗体之间发生了冲突,就会对试验成果产生较大影响。要防止这一问题,我们能够挑选购买“matched pair"的捕获/检测抗体对,这些打包在一起的抗体是商家经过验证才引荐的好组合。

 

穿插反响
如果抗体间发生冲突或穿插反响就会影响整个试验的特异性。其间抗体来历所带来的兼容性就是穿插反响的一个要素。虽然现在购买源自动物的抗体越来越简单,我们仍有必要确认一下是否会产生穿插反响的问题。
在用双抗夹心法进行ELISA试剂盒检测时,检测用的二抗有必要特异性针对检测一抗,而不能与捕获抗体起反响。如果检测用二抗与捕获抗体结合,试验特异性就会大打折扣。一般我们选用源自不同宿主的捕获抗体和检测一抗,来防止上述问题。
 


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