在免疫酶技术中，首先要断定的变异要素就是酶符号物的作业浓度。因为酶符号物浓度的很小改变，便可导致实验成果发生很大的波动。别的，因为浓度过高，可使非特异性反响添加，而浓度过低又可影响测定的敏感性。因此，正式实验前有必要滴定其作业浓度。
(一)酶符号抗体的滴定办法：将抗原(或抗体)物理吸附于固相载体上，然后将经过一系列稀释的酶标抗体(或抗Ig抗体)与吸附在载体上的抗原(或抗体)起反响，以酶与底物的显色反响程度来断定酶符号抗体的效价，或称作业浓度。
(二)过程：先将抗原(或抗体)用0.05M PH9.6包被缓冲液稀释为10μg/ml左右，于聚苯乙烯板孔内加0.1ml，4℃过夜，次日以洗刷缓冲液洗刷3次。酶符号抗体用1%BSA-PBS液顺次稀释成1:100，1:200，1:400，1:800，1:1600(依据据抗体的滴度而定)，分别参加反响孔中，每个稀释度二孔，每孔0.1ml，37℃孵育1小时后洗刷。然后加底物液，每孔0.1ml，37℃10～30分钟。以2M H２SO4 0.05ml终止反响。
(三)成果断定：主要以ELISA比色仪读取各孔OD值，并以OD为纵座标，结合物浓度为横座标，制作滴定曲线。由曲线上查得OD值为1.0左右，且曲线斜率zui大时的酶标抗体稀释度，即为该符号物的作业浓度。
注意事项
1. 在具有高质量HRP的条件下，所要符号的抗体也要活性高、效价高(zui低1:16)、纯度高、亲和力好，这是保证符号物效价高，免疫活性好的首要条件。
2. 所运用试剂的PH和浓度及用量有必要严厉把握。所用试剂，(或必需)新鲜制造。如在戊二醛符号法中所用戊二醛应为新鲜纯品，因戊二醛贮存过久可构成缩和体(杂质)。不然，影响符号作用。
3. 室温搅拌时须避光，室内温度一般在25℃为宜。符号物每次透析前，须认真查看，避免漏液。
4. 浓的符号物相当安稳，常参加30-40%甘油于-10℃下保存。4℃可保存1-2年，但稀释成1:10，只能保存数周。已制造的运用液应在12小时内用完。切忌反复冻融。
