1. 加规范品：在酶标包被板上设规范品孔，顺次参加不同浓度的规范品50ul(主张每个浓度做2个平行孔)
2. 加样：ELISA试剂盒别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其他各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl，然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：ELISA试剂盒除空白孔外每孔参加酶标试剂50μl。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先参加显色剂A50μl，ELISA试剂盒再参加显色剂B50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 停止：每孔加停止液50μl，停止反响(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：ELISA试剂盒以空白空调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。
