现在常用的几种ELISA试剂盒办法有：测定抗体的直接法，测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。本实验选用直接法测定单克隆抗体效价。其主要进程为：首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反响板的凹孔内，加待测抗体，保温后洗刷以除去未的杂蛋白质，加酶标抗抗体，保温后洗刷，加底物保温30分钟后，加酸或碱停止酶促反响，用目测或光电。
①抗原包被：兔抗人IgG ELISA试剂盒作为抗原，用包被液l：8000稀释，100μL/孔参加聚苯乙烯96孔反响板中。4℃放置过夜。
②洗刷：次日倾去凹孔内的液体，洗刷液洗3次。
③关闭：加l00μL/孔关闭液，室温放置0.5h.
④洗刷：用洗刷液洗3次。
⑤加待测样品(一抗)：将含单克降抗体的细胞培养上清在另-块板上用PBS 接连稀释(依照1：2或1：10)，100μL /孔加到 已包被的板上，每个样品平行做两份，PBS 或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育 1~2h。
⑥洗刷：用洗刷液洗3次。
⑦加酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP，用关闭液l ：8000稀释，100μL／孔，加盖37℃恒温箱温育1h。
⑧洗刷：用洗刷液洗5次，蒸馏水洗2次。
⑨显色：加新鲜配制的底物溶液100μL/孔，室温暗处放置5～30min，显示蓝色。
⑩ELISA试剂盒停止反响、比色：加50μL/孔停止液。ELISA试剂盒色彩变黄；用酶标仪测定450nm 处各孔的吸光值，阳性反响的zui大稀释度为待测 样品的效价。
