（一）ELISA试剂盒(酶联免疫剖析试剂盒)前史：
ELISA试剂盒自从60-70时代面世以来，得到*科研作业者的认可及推崇，在欧美及我国获得很大的推行，尤其是国内生化领域的长足发展。 Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的试验确诊方法。由于其试剂安稳、易保存，操作简洁，成果判别较客观等要素，已广泛应用在免疫学查验的各领域中。ELISA试剂盒可检测样本：体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等等。ELISA试剂盒在国内有许多种叫法：例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫剖析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。
（二）科研ELISA试剂盒操作怎么让ELISA体系更安稳：
ELISA检测体系可谓是免疫学反响应用到科研出产中zui为活络的技术手段。但是在新老手操作过程中总是会呈现或大或小的问题，本人在刚开始做ELISA时就面对许多困难，虽然有师兄师姐铺路，但仍是常常做得乌烟瘴气，比方说花板，假阳性，全显色，悉数显色，显色比空白还低,自己也为此苦恼过很长一段时刻，跟着自己技术水平得进步，或多或少地也把握了ELISA体系的脾气，也是游刃有余吧，现在做方阵，做ELISA已是驾轻就熟了，曾经检测一种抗体用整整一下午还算得晕晕的，现在给我十个八个的从包被到显色，一个作业日根本搞定。下面就由我抛砖引玉地来说一下，做ELISA的经验总结:
1、包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这到你做出的抗体可不能够被其辨认，所以保存抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严厉正告我必定要在冰浴下缓慢消融就是这个道理。还有有的包被原可能不是蛋白，关于*和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，我把方法扼要的列出如下:①亲和素*:先亲和素先包被载体，参加*化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩展应用于各种抗原物质的定量测定。②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后参加ELISA板孔中，开盖置冰箱guo ye或凉风吹干，待酒精挥发后，让脂质天然干固在固相外表。③小分子有必要依托和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。
2、包被液的挑选，一般挑选ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需求，包被原的特殊性也可能选用中性的缓冲溶液来包。应留意以下原理：由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间的效果，这种物理吸附对错特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质一般含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体外表。具体的试验还要有巩固的理论外也要实践，看一下终究可不能够应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才说到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
3、关闭：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。关闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空地，从而排挤ELISA后的过程中搅扰物质的再吸附。常用关闭剂有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉，比较价廉，能够高浓度运用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(首要为了扫除类似蛋白搅扰)和酪蛋白等等。但终究选用什么，要依据试验具体来实践。
4、洗刷板：能够说在ELISA操作中，洗刷是zui首要的关键技术。由于聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到别离游离的和结合的酶符号物的意图，铲除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的搅扰物质，在洗刷时又应把这种非特异性吸附的搅扰物质洗刷下来。所以在洗板时会有必定差错，人为要素很大(当然有条件的用洗板机在外)，洗的不*或串了孔，对如此活络的ELISA体系但是不小的影响。
5、加抗体标本(和二抗):留意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释，也可用关闭液去稀释。如需加二抗，还要留意二抗的作业浓度，太低则上色浅。
6、显色:显色体系又许多，我们一开始做的时分，要挑选适合的显色体系。留意显色体系酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠。
7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，如呈现问题也好剖析。
（三）相关常识：
1、问：做直接Elisa法测试小鼠血清中的IgE抗体，设空白对照、和阴性对照、阳性血清稀释倍数为5千、1万、10万、20万不等，用的是*符号的羊抗鼠IgE抗体，和亲和素的辣根过氧化物酶。但是成果除了空白对照孔没有色彩外，其他各孔全有色彩，而且OD值都相差不大，为什么?
答复：可能原因如下：
(1) 水质被金属离子等污染;避免方法尽量运用新鲜水或蒸馏水。
(2) 洗刷不充沛，样品中其它成分残留或酶残留;避免方法洗刷液应注满微孔，充沛洗刷。
(3) 移液头重复运用，未洗净或消毒不*; 避免方法移液头一次性运用。
(4) 酶标板活络度过高。
(5) 一抗显色时刻的操控等等，关于ELISA的每一步都要留意才行。
2、ELISA加样时的防错小经验
(1)用一张写满字的纸，字越多越好，比方报纸，垫在下面，这样，加过标本的小孔看过去下面的字会变小，没加的字正常，十分简单区别。
(2)能够使用液面反光与没有加的孔加以差异
(3)在标本加完后，再把加样枪全压下，使液面发生小气泡，也能够加以区别
3、棋盘试验的操作方法:
(1)将抗原按必定的梯度倍比稀释后，依照ELISA从上到下(或许从左到右)的顺序包被。
(2)将抗体按必定的梯度倍比稀释后依照ELISA从左到右或许从上到下参加。
(3)二抗的稀释倍数是必定的，然后显色，读值。
ELISA试剂盒OD值的测守时，波长要依据显色剂的不同而定，一般上我们都运用TMB显色，450nm读值。依据读值得成果能够选定适宜的抗原和抗体效价，这就是棋盘 试验的意图，如果抗原包被量已知而二抗的作业浓度不确定的话就用一抗和二抗作棋盘试验。
