人源细胞培养过程中可能出现的问题及解决方式

在人源细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞不贴壁、生长缓慢、生长不好，甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。
一、培养细胞不贴壁
可能原因： 
●*消化过度 
●支原体污染 
●培养基pH值过碱（NaHCO3分解）               
●细胞老化 
●接种细胞起始浓度太低或太高 
解决方法： 
●缩短*消化时间或降低*浓度 
●分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。 
●使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2 
●启用新的保种细胞 
二、悬浮细胞成簇
可能原因： 
●培养液中含钙、镁离子； 
●支原体污染； 
●蛋白酶过度消化使得细胞裂解； 
●DNA污染 
解决方法： 
●用无钙镁*洗涤细胞，轻巧吹吸细胞获得单细胞悬液； 
●分离培养物，检测支原体； 
●用DNaseI处理细胞
三、培养细胞生长缓慢
可能原因：
●由于更换不同培养液或血清； 
●培养液中一些人源细胞生长必需成分如*或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏； 
●培养物中有少量细菌或真菌污染； 
●试剂保存不当； 
●接种细胞起始浓度太低； 
●细胞已老化； 
●支原体污染 
解决方法： 
●比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液； 
●换入新鲜配置培养液，或补加*及生长因子；
●用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；
●血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清*培养液在2-8℃保存，需在1周内用完；
●增加接种人源细胞起始浓度； 
●换用新的保种细胞； 
●分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。