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人源细胞传代方法

时间:2017/12/21阅读:174
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1.从培养容器中吸出用过的人源细胞并丢弃;

2.用不含钙、镁的*冲洗细胞(每10cm2培养表面积约2mL溶液);从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液,以避免搅动细胞层,前后摇晃容器数次(注:冲洗步骤可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁);

3.从培养容器中吸出冲洗液并丢弃,向培养瓶中加入预热的解离剂;试剂量应足以覆盖细胞层(每10cm2大约0.5mL);

4.轻轻摇晃容器,使试剂*覆盖细胞层;吸出多余解离试剂,T25细胞培养瓶留200ul左右即可;

5.将培养容器在室温下孵育约2分钟(请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异);

6.在显微镜下观察细胞解离情况;如果解离程度未达90%,可将孵育时间延长几分钟,每30秒钟检查一次解离情况;也可轻轻拍打培养容器以加快细胞解离;

7.细胞解离程度大于等于90%时,倾斜培养容器,使细胞上液体尽快流尽;加入所用解离剂两倍体积的预热*生长培养基;吹打细胞层表面数次,使培养基分散;

8.将细胞转移到15mL无菌离心管中,以200×g的离心力离心3-5分钟(请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异);

9.用zui少体积的预热*生长培养基重新悬浮细胞沉淀,将人源细胞悬液按照推荐比例稀释,并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中,把细胞放回培养箱(注:如果使用培养瓶,将其放入培养箱前应将瓶盖旋松,以便进行充分的气体交换,除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖)。
20mg/支    42553-65-1    Crocin    西红花苷
20mg/支    94238-00-3    Crocin I    西红花苷I
20mg/支    55750-84-0    Crocin II    西红花苷II
20mg/支    480-16-0;654055-01-3    Morin hydrate    桑色素
20mg/支    77-95-2    D-(−)-Quinic acid    D-(-)-奎宁酸
20mg/支    2415-24-9    Catalpol    梓醇
20mg/支    60-81-1    Phlorizin    根皮苷
20mg/支    5289-74-7    Ecdysterone    蜕皮激素
20mg/支    23513-14-6    6-gingerol    6-姜酚
20mg/支    4431-01-0; 81944-09-4    Ligustilide    蒿本内酯
5mg/支    19130-96-2    1-Deoxynojirimycin    脱氧野尻霉素
20mg/支    546-43-0    Alantolactone    土木香内酯
人源细胞

 

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