免疫细胞几种目前较为常用和*的固定剂

大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 
1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 
试剂：多聚甲醛 40g 
0.1mol/L磷酸缓冲液 至1000ml 
配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末*溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，zui后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较*保存。 
2.4%多聚甲醛-*/氢氧化钠 
试剂：A液：多聚甲醛 40g 
蒸馏水 400ml 
B液：Na2HPO4·2H2O 16.88g 
蒸馏水 300ml 
C液：NaOH 3.86g 
蒸馏水 200m 
配制方法：A液在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛*溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，zui后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的*保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 
3．Bouin’s液及改良Bouin’s液 
试剂：饱和苦味酸 
40%甲醛 250ml 
冰醋酸 50ml 
配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），zui后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸在临用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。 
该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3～3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的*保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。 
4．Zamboni’s(Stefanini’s)液 
试剂：多聚甲醛 20g 
饱和苦味酸 150ml 
Karasson-Schwlt’s PB 至1000ml 
配制方法：称取多聚甲醛20g，加入饱和苦味酸150ml，加热至60℃左右，持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后，加Karasson-Schwlt’s PB至1000ml充分混合（Karasson –Schwlt’s磷酸缓冲液的配制配制方法见后）。 
该固定液适于电镜免疫细胞化学，对超微结构的保存较纯甲醛为优，也适于光镜免疫细胞化学研究，为实验室常用固定剂之一。我们在应用中，常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸，以增加其对组织的穿透力和固定效果，保存更多的组织抗原。固定时间为6～18h。 
5．PLP液 PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液（Periodate-Lysine-paraform-alde－hyde fixative） 
试剂：过碘酸钠 
赖氨酸盐酸盐（或*）： 
多聚甲醛 
蒸馏水