质粒DNA提取实验的实验步骤

一、其它elisa免疫检测试剂盒材料与试剂准备 
 
1.  材料：大肠杆菌。
 
2.  仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪。
 
3.  试剂：
 
（1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl（pH7.4），10 mM EDTA（pH8.0），50 mM葡萄糖，高压灭菌，4℃保存。
（2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 现配现用。
（3）Solution III ：5 N KAc pH4.8，高压灭菌，4℃保存。
（4）3 M NaAc PH5.2，高压灭菌，4℃保存。
（5）异丙醇，*（8 mg/ml），酚，无水乙醇，70%乙醇，LB培养基，电泳试剂。
 
二、其它elisa免疫检测试剂盒操作步骤 
 
1.  细菌繁殖：LB培养基，2 ml/20ml，37℃，200 rpm，摇一摇，过夜。
 
2.  离心10 min，5 000 rpm， 4℃；弃上淸液。
 
3.  沉淀（菌体细胞）预冷的TES缓冲液洗涤，离心10 min，5 000 rpm， 4℃，加入预冷的1 ml Solution I，冰浴10 min。
 
4.  重新悬浮，加入150 ul*母液，室温放置5 min。
 
5.  加入1.2 ml Solution II， 冰浴5 min。
 
6.  加入0.9 ml预冷乙酸钾，混匀，离心10 min，12 000 rpm，4℃。
 
7.  加入1.5 ml异丙醇，-20℃冰箱内放置15 min。
 
8.  离心10 min，12 000 rpm，4℃。
 
9.  取沉淀，悬于400 ul TE缓冲液中。
 
10.  加入40 ul，3 M NaAc。
 
11.  酚，抽提，乙醇沉淀。
 
12.  离心10 min，12 000 rpm，4℃。
 
13.  取沉淀，冷冻干燥，再悬浮于50 ul TE缓冲液中。
 
14.  电泳检测提取DNA的质量其它elisa免疫检测试剂盒。