C肽放免试剂盒试验方法及样本要求

C肽放免试剂盒试验原理、方法   

C-P 免放药盒是一种固相“三明治”夹心式免疫放射量度分析，由两株单克隆 抗体识别和分析。两株单克隆抗体分别抗 C-P 分子相距很远的两个位点：株单 抗包被于试管底部内壁；第二株单抗用 125I 进行放射性标记，用作示踪剂。存在于 标准品或待测样品中的 C-P 分子被夹在两株单抗之间。过量未结合的示踪剂在洗涤 过程中容易地被除去，而抗体仅保留了被吸附的抗体-抗原-示踪剂结合物。结合在 包被管上的放射活性的量与测定开始时存在的 C-P 的量成比例。

由于 C-P 极不稳定，溶解后需立即使用，其余溶液按每次使用量分装后置-20℃可 储存 3 个月，只能冻融一次，避免反复冻溶。

【适用仪器】 1、γ－计数器 2、振荡器

【样本要求】 110 微升人血清样本。 采静脉血 5ml 于塑料试管中，静置使其凝固后，1500 转／分离心，取其上清液， 放置玻璃瓶中。如果样本不立即使用，可在-25℃~-18℃储存 6 个月。

【试验方法】

1、 将实验所需试剂及样本放置室温，平衡至少 30 分钟以上才可进行操作； 标准品用 1.0ml 去离子水溶解后轻轻摇匀，放置 10min 左右方可使用。

2、 打开包被试管包，取出包被管进行编号，所有实验均做双管重复；

3、 取每个浓度的标准品、质控血清和样本 100µl 加入相应编号的试管中；

4、 每管均各加入 100µl 标记抗体液，室温（17-27℃）振荡 1 小时后，吸干 或倒出；

5、 每管均各加入 2ml 洗涤液后，吸干或倒出，再重复操作一遍此步骤；

6、 用 γ-计数器测定每管 1 分钟的放射性强度计数；

7、 从标准曲线上读取样本及质控血清的浓度。