AH109 感受态细胞 100ul*50-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

shēng huà shì jì BOC-L-* 容量： 100克

shēng huà shì jì BOC-L-* 容量： 100克

shēng huà shì jì BOC-L-* 容量： 1公斤

shēng huà shì jì BOC-L-羟* 容量： 25克

shēng huà shì jì BOC-L-* 容量： 5克

shēng huà shì jì BOC-L-*甲酯 容量： 25克

shēng huà shì jì BOC-L-* 容量： RT 10克

shēng huà shì jì BOC-L-* 容量： 25克

shēng huà shì jì BOC-L-* 容量： 100克

shēng huà shì jì BOC-L-高苯* 容量： 100克

shēng huà shì jì BOC-L-* 容量： 1公斤

shēng huà shì jì BOC-L-脯氨醇 容量： 25克

AH109 感受态细胞 100ul*50 shēng huà shì jì BOC-L-* 容量： 500克

shēng huà shì jì BOC-L-丙氨醇 容量： RT 5克

shēng huà shì jì BOC-L-苯* 容量： 100克

shēng huà shì jì BOC-L-苯* 容量： RT 10克

shēng huà shì jì BOC-L-苯丙氨醇 容量： 100克

shēng huà shì jì BOC-D-* 容量： 25克

shēng huà shì jì BOC-D-天冬酰胺 容

Caki-1, 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞

Ishikawa, 人子宫内膜癌细胞系

ACHN, 人肾细胞腺癌细胞

JEC, 人子宫内膜腺癌细胞系

BPH-1, 人前列腺增生细胞

RL95-2, 人子宫内膜腺癌细胞系

Ca Ski, 人癌细胞

MCF-7 [MCF7], 人癌细胞系

Raw264.7, 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

GBC-SD, 人胆囊癌细胞

5637, 人膀胱癌细胞

CNE1, 人鼻咽癌细胞系

HT-29, 人结肠癌细胞

T24, 人膀胱癌细胞

5-8F, 人高转移鼻咽癌细胞系

HCT116, 人结直肠癌细胞

LncaP, 人前列腺癌细胞

6-10B, 人鼻咽癌细胞系

lovo, 人结肠癌细胞

DU 145, 人前列腺癌细胞

Hep-2, 人喉癌细胞系

量： RT 10克

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。