培养原代细胞的三个注意事项

培养原代细胞的三个注意事项：
1. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。

2. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。原代细胞培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）
异丙安替比林    100525-200301    对照品    含量测定用        200mg
羟喜树碱    100526-200301    对照品    HPLC法含量测定        50mg
赖氨匹林    100527-200401    对照品    UV法含量测定        50mg
愈创木酚甘油醚    100528-200401    对照品    HPLC法含量测定        50mg
草乌甲素    100530-200501    对照品    含量测定（HPLC）        50mg
盐酸美司坦    100531-200501    对照品    鉴别（TLC）        100mg
喜树碱    100532-200301    对照品    HPLC法含量测定        50mg
甘露醇    100533-200301    对照品    TLC法鉴别用        100mg
果糖二磷酸钠    100539-200301    对照品    含量测定         100mg

3. 不要怕消化。在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞*变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，原代细胞尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。