原代细胞冻存液的原理及配制方法

原代细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以Z大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中，及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是*的实验操作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等导致实验失败，如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而前功尽弃。
1常用冻存液组成成分
20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培养液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止细胞内冰晶形成。将DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占总体积的10%，然后滤膜过滤后分装保存备用。
2DMSO在冻存液中的作用
DMSO在4℃时对细胞无明显毒性，分子量小、溶解度大、易透过细胞膜，降低细胞外未结冰溶液中溶质浓度，使细胞免受高浓度溶质的损伤,细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩；DMSO与水分子结合，可使冰点下降，减少细胞内冰晶的形成，从而减少冰晶损伤。
3原代细胞注意事项     
  1.DMSO 不用高压灭菌；DMEM不能高温高压灭菌，可以过滤除菌。
  2.DMSO要用新的，而且要避光保存。
  3.DMSO：含10%FBS的DMEM=1:9(体积比)。
容量：        500KU    shēng huà shì jì        依来铬氰蓝R
容量：    RT    25克    shēng huà shì jì        衣康酸
容量：    RT，避光    5克    shēng huà shì jì        伊文斯蓝
容量：        10片/箱    shēng huà shì jì        伊红染液
容量：        1米    shēng huà shì jì        伊红美兰琼脂平板
容量：        250克    shēng huà shì jì        伊红美兰琼脂
容量：        25克    shēng huà shì jì        一氧化锡
容量：        25克    shēng huà shì jì        一氧化硅
容量：    RT    500支/包    shēng huà shì jì        一氧化氮合成酶测试盒[测总NOS（T-NOS）]
容量：    RT    50块/盒    shēng huà shì jì        一氧化氮合成酶测试盒（测T-NOS、INOS、CNOS三型同时
容量：        10块/包    shēng huà shì jì        一氧化氮测试盒（还原酶法）
原代细胞