当前位置:上海莼试生物技术有限公司>>细胞培养>>细胞,组织提取物>> T25m2人滑膜组织提取物操作
收到冻存细胞的处理方法:
1.37°C水浴预热培养基;
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续暖细胞);
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;
4.弃上清,加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中,轻轻晃匀;
5.置于37°C,5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧);
6.第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
人滑膜组织提取物【Bone: Normal Human Synovial Derivatives】滑膜组织主要功能:(1)产生润滑液成分,并且与关节腔的吸收和血液/润滑液交换有关。(2)是自身自分泌和旁分泌网络中效应因子的一部分。公司科技提供来自新鲜或冷冻人滑膜组织中高质量的总RNA,PCR准备的第一条cDNA链,蛋白质及其亚组分。这些临床定义的正常人体组织标本采集自各地方医院,采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。
潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
产品名称 | 人滑膜组织提取物操作 |
规格 | T25m2 |
货号 | CS-964224 |
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项:
1.接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色
,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
1130067-34-3 CAY10594 25mg Aeromonas sobria温和气单胞菌LAMP试剂盒
1130067-34-3 CAY10594 5mg Bacillus spp.芽孢杆菌通用LAMP试剂盒
1130070-45-9 H-α-cyclopropyl-Ala-OH . HCl 1g Aeromonas salmonicida灭鲑气单胞菌LAMP试剂盒
113082-99-8 Calcipotriol Impurity C 10mM*1mLinDMSO Aeromonas punctata斑点气单胞菌LAMP试剂盒
113082-99-8 Calcipotriol Impurity C 500mg Aeromonas salmonicida灭鲑气单胞菌LAMP试剂盒
管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)索拉菲尼-d3Sorafenib-methyl-d3质量规格:美国进口
FGF2 Others Human VEGF121 / VEGF-A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 硫康唑Sulconazole质量规格:美国进口
非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H20876-羟基6-Hydroxycoumarin质量规格:>98%(GC);进分
CCD-1095Sk细胞,皮肤细胞 肝癌细胞,HHCC细胞 CL-0176OP9(小鼠骨髓基质细胞)5×106cells/瓶×2甘氨石胆酸(GLCA)Lithocholylglycine质量规格:美国
叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21匹卡米隆Pikamilone质量规格:>98%,BR
人滑膜组织提取物操作ScaBER细胞,膀胱鳞癌细胞 非小细胞肺腺癌细胞,NCI-H2087细胞 RN-h, 大鼠海马趾神经元盐酸土霉素质量规格:>95%,BROxytetracycline HCl
豚鼠胚胎细胞;104C1盐酸土霉素(标准品)质量规格:效价测定Oxytetracycline HCl
BST1 Others Human CD157 细胞裂解液 (阳性对照) 缩宫素,醋酸催产素质量规格:>97%,BROxytocin Acetate
CL-0451SW-13(肾上腺皮质癌细胞)5×106cells/瓶×2奥美拉唑 质量规格:>99%,USP33,BR,可用于细胞培养Omeprazole
CTSS Others Mouse 小鼠 Cathepsin S / CTSS 细胞裂解液 (阳性对照) 奥美拉唑 (标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Omeprazole
请输入账号
请输入密码
请输验证码
以上信息由企业自行提供,信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责,仪表网对此不承担任何保证责任。
温馨提示:为规避购买风险,建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。