转基因品系油菜24-18-17染料法qPCR试剂盒 返回列表页

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：

产品名称：转基因品系油菜24-18-17染料法qPCR试剂盒
货号:CP97170
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。

以下是转基因品系油菜24-18-17染料法qPCR试剂盒公司正在热销的产品：
anti- CD336 antibody资源名称金黄壳囊孢种属:Cytospora│chrysosperma (Pers.) Fr.分离基物:树皮提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:14生长条件:25-27

anti- CD34 antibody资源名称针叶树散斑壳种属:Lophodermium│conigenum (Brunaud) Hilitzer分离基物:针叶病斑提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:14生长条件:25-27

anti- CD36 antibody资源名称松针散斑壳种属:Lophodermium│pinastri (Schrad.) Chevall.分离基物:针叶病斑提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:14生长条件:26

anti- CD37 antibody资源名称四川散斑壳种属:Lophodermium│sichuanense D.X. Qiu & Y.G. Liu分离基物:针叶病斑提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:14生长条件:25-27

anti- CD38 antibody资源名称黄白侧耳（姬菇）种属:Pleurotus│cornucopiae (Paulet) Rolland分离基物:子实体提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:14生长条件:25-27

anti- CD38 antibody资源名称香菇5种属:Lentinula│edodes (Berk.) Pegler分离基物:子实体提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:14生长条件:28

anti- CD39 antibody资源名称草芽枝霉种属:Cladosporium│herbarum (Pers.) Link分离基物:草莓提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:水果保鲜研究培养方法培养基:14

anti- CD4 antibody资源名称细交链孢霉种属:Alternaria│tenuis Nees分离基物:杏提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:植物病原真菌；为杏果贮藏和该类菌系统学研究提供依据。培养方法培养基:14

anti- CD4 antibody资源名称尖镰孢菌种属:Fusarium│oxysporum Schltdl.分离基物:国槐幼树干部提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:寄生？为幼苗期槐树栽植提供依据。培养方法培养基:14

anti- CD40 antibody资源名称美国大钟菇种属:Agricarius│bisporus (Lange) Imbach分离基物:组织块分离基物斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:14生长条件:25

anti- CD41/Integrin alpha 2b antibody资源名称青黄褐硬皮马勃种属:Scleroderma│sp.分离基物:组织块提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:14生长条件:25-30

anti- CD42b antibody资源名称地星种属:Geastrum│sp.分离基物:针叶林提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:药用培养方法培养基:72

anti- CD43 antibody资源名称褐疣柄牛肝菌种属:Leccinum│scabrum (Bull.) Gray分离基物:阔叶林提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:食用培养方法培养基:72

anti- CD43 antibody资源名称平田头菇种属:Agrocybe│pediades (Fr.) Fayod分离基物:子实体提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:食、药用培养方法培养基:14

anti- CD44 antibody资源名称薄花边伞种属:Psathyrella│candolleana (Fr.) Maire分离基物:子实体提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:可食用培养方法培养基:14

anti- CD44 antibody资源名称可可球二孢（斜面）种属:Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.分离基物:变色木材提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:综合PDA：马铃薯煮汁1000mL，磷酸二氢钾 3g，硫酸镁 1.5g，葡萄糖 20g，维生素B1 10mg，琼脂 20g，pH自然。马铃薯煮液：200g马铃薯，去皮，切块，放入蒸馏水中煮沸30min，取滤液定容至1000mL,备用。121℃，15min。生长条件:25℃，好氧。

anti- CD44 antibody资源名称罗氏菌属种属:Rothia│sp.分离基物:树皮表面提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:141生长条件:30

anti- CD45 antibody资源名称冬虫夏草（斜面）种属:Ophiocordyceps sinensis (Berk.) G.H. Sung J.M. Sung Hywel-Jones提供形式:斜面培养物模式菌株:no应用领域:研究；教学。食药用菌培养方法培养基:综合PDA：马铃薯煮汁1000mL，磷酸二氢钾 3g，硫酸镁 1.5g，葡萄糖 20g，维生素B1 10mg，琼脂 20g，pH自然，121℃，15min。生长条件:24℃，好氧。生长特性子座棒状，生于鳞翅目幼虫体上，一般只长一个子座，少数2-3个，从寄主头部、胸中生出至地面。长5-12cm，基部粗1.5-2cm，头部圆柱形，褐色，中空。子囊壳椭圆形至卵圆形，基部埋于子座中，330-500μm×138-240μm，子囊长圆筒形，240-480μm×12-16μm。子囊孢子2-3个，无色，线形，横隔多且不断，160-470μm×4.5-6μm。自然分布在海拔3000-5000米之间的高山草甸和高山灌丛带，寄生于虫草蝙蝠蛾(Hepialus armoricanus)的幼虫体上。
转基因品系油菜24-18-17染料法qPCR试剂盒小鼠mycoplasma pneumoniae(MP)antibody(IgG)Human MMP-8(Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠 PARC Human MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit0.188ng/ml0.313-20ng/ml

小鼠 SP-C Human MYD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠 SP-B Human KLK10/NES1(Kallikrein-10) ELISA Kit0.375ng/ml0.625-40ng/ml

小鼠 SP-A Human NGF/NGFβ(Beta-nerve growth factor) ELISA Kit9.375pg/ml15.6-1000pg/ml

小鼠 SP-D Human NID-1(Nidogen-1/Entactin) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠 MCT Human NT-3(Neurotrophin-3) ELISA Kit18.75pg/ml31.2-2000pg/ml