转基因品系大豆DP356043探针法qPCR试剂盒 返回列表页

参数规格：

产品名称：转基因品系大豆DP356043探针法qPCR试剂盒
货号:CP96960
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

以下是转基因品系大豆DP356043探针法qPCR试剂盒公司正在热销的产品：
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Human CCDC82(Coiled-coil domain-containing protein 82) ELISA Kit资源名称灰色产色链霉菌种属:Streptomyces│griseochromogenes分离基物:土壤

Human HMGN1(Non-histone chromosomal protein HMG-14) ELISA Kit资源名称小金色链霉菌种属:Streptomyces│microaureus分离基物:土壤

Human IGIP(IgA-inducing protein homolog) ELISA Kit资源名称密苏里游动放线菌种属:Actinoplanes│missourieneis分离基物:土壤表层5-10cm处

Human STS(Steryl-sulfatase) ELISA Kit资源名称微白黄链霉菌种属:Streptomyces│albidoflavus提供形式:斜面培养物

Human S100A2(Protein S100-A2) ELISA Kit资源名称黄质产色链霉菌种属:Streptomyces│xanthochromogenes分离基物:土壤

Human CCT8L1P(Putative T-complex protein 1 subunit theta-like 1) ELISA Kit资源名称娄彻氏链霉菌种属:Streptomyces│rochei分离基物:土壤

Human HMMR(Hyaluronan mediated motility receptor) ELISA Kit资源名称韦腊链霉菌种属:Streptomyces│werraensis分离基物:土壤
转基因品系大豆DP356043探针法qPCR试剂盒OxLDL(Oxidized low-density lipoprotein)形态特性  上皮样细胞生长特性 贴壁生长特征特性   培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  优质胎牛血清，10%

NRN1|NRN(Neuritin)|neuritin 1形态特性  上皮样；圆形、成团　生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞系由Lasfargues E和 Coutinho WG建立，源于一名60岁患有浸润性导管癌的白人女性的实体瘤。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%；10ug/ml 人重组insulin

MYOCD|MYCD(Myocardin)|BSAC2A|MYCD|MYOCD|Srfcp|形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  HTLV-1感染 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%

MITF|BHLHE32(Microphthalmia-associated transcription factor)|MI|WS2A|Waardenburg syndrome|type 2A|Class E basic helix-loop-helix protein 32形态特性  骨髓瘤细胞样生长特性 贴壁生长特征特性   培养条件  IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium  新生牛血清，20%

MDH2(Malate dehydrogenase|mitochondrial)形态特性  上皮样生长特性 贴壁生长特征特性   培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10% FBS

LMAN2|C5orf8|VIP36|Vesicular integral-membrane protein 36|Glycoprotein GP36b|Lectin mannose-binding 2形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  不分泌免疫球蛋白,HAT敏感. 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%

GDF5|BMP-14|CDMP-1|BMP14|Cartilage-derived morphogenetic protein 1|cartilage-derived morphogenetic protein-1|CDMP1LAP4|GDF-5|growth differentiation factor 5|growth|differentiation factor 5|OS5|Radotermin|radotermin|SYNS2形态特性  上皮样细胞生长特性 贴壁生长特征特性  这株细胞来源于一个淋巴结转移。 患者接受了初期放疗。 细胞均一性的部分缺失p53蛋白，并缺少p53蛋白表达。 细胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白，而不合成促胃液释放肽(GRP)。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  优质胎牛血清，10%

MMP-17|MMP17|MT4-MMP|matrix metallopeptidase 17(membrane-inserted)|matrix metalloproteinase-17|membrane-type matrix metalloproteinase 4|membrane-type-4 matrix metalloproteinase|MT4MMP|MT-MMP 4|MTMMP4形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  该细胞来源于一位3岁的白人Burkitt淋巴瘤患者；EBV阴性；表达IL-4受体和低亲和性IgE受体（CD23）；每个细胞表面大约有1500个IL-4的结合位点；分泌IgM（lamda L）；表达膜型和分泌型的免疫球蛋白。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS