转基因品系大豆W62染料法qPCR试剂盒 返回列表页

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：

产品名称：转基因品系大豆W62染料法qPCR试剂盒
货号:CP96980
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。

以下是转基因品系大豆W62染料法qPCR试剂盒公司正在热销的产品：
Human HO2(Heme Oxygenase 2) ELISA Kit资源名称沙门氏菌种属:Salmonella│sp.提供形式:其他

Human HSF2(Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit资源名称埃森沙门氏菌种属:Salmonella│essen提供形式:其他

Human HSP-70(Heat Shock Protein 70) ELISA Kit资源名称马流产沙门氏菌种属:Salmonella│abortus-equi提供形式:冻干物

Human HSPG(Heparan Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit资源名称汤卜逊沙门氏菌柏林变种种属:Salmonella│thompson var.berlin提供形式:冻干物

Human HSPβ6/HSP-20(Heat Shock Protein Beta 6) ELISA Kit资源名称维尔肖沙门氏菌种属:Salmonella│virchow提供形式:冻干物

Human HYOU1(Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit资源名称杜塞尔多夫沙门氏菌种属:Salmonella│duesseldorf提供形式:冻干物

Human IAP(Integrin Associated Protein) ELISA Kit资源名称塔拉哈西沙门氏菌种属:Salmonella│tallahassee提供形式:冻干物

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Human IgA1(Immunoglobulin A1) ELISA Kit资源名称维斯拉哥沙门氏菌种属:Salmonella│weslaco提供形式:冻干物

Human IgA2(Immumoglobulin A2) ELISA Kit资源名称鼠伤寒沙门氏菌宾斯变种种属:Salmonella│typhimurium var.binns提供形式:冻干物

Human IGF2BP3(Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3) ELISA Kit资源名称海德尔堡沙门氏菌种属:Salmonella│heidelberg提供形式:冻干物

Human IGF2R(Insulin Like Growth Factor 2 Receptor) ELISA Kit资源名称阿邦尼沙门氏菌种属:Salmonella│abony提供形式:冻干物

Human IGFALS(Insulin Like Growth Factor Binding Protein, Acid Labile Subunit) ELISA Kit资源名称猪伤寒沙门氏菌武达森变种种属:Salmonella│typhi-suis var.voldagsen提供形式:冻干物

Human IgG1(Immunoglobulin G1) ELISA Kit资源名称波茨坦沙门氏菌种属:Salmonella│potsdam提供形式:冻干物

Human IgG2(Immunoglobulin G2) ELISA Kit资源名称慕尼黑沙门氏菌种属:Salmonella│muenchen提供形式:冻干物

Human IgG3(Immunoglobulin G3) ELISA Kit资源名称罗斯托克沙门氏菌种属:Salmonella│rostock提供形式:冻干物

Human IgG4(Immunoglobulin G4) ELISA Kit资源名称莫斯科沙门氏菌种属:Salmonella│moscow提供形式:冻干物
转基因品系大豆W62染料法qPCR试剂盒Glucose phosphomutase 1|PGM 1|PGM1|phosphoglucomutase 1形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  这株细胞来源于原发性透明细胞腺癌。细胞呈边界不清楚的球形，高核质比，有微绒毛和桥粒。可以在软琼脂中生长。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  优质胎牛血清，10%

UBE2A|RAD6A|UBE2A|HHR6A|HR6A|RAD6 homolog A|UBC2|Ubiquitin carrier protein A|ubiquitin-conjugating enzyme E2 A|Ubiquitin-protein ligase A形态特性  混合形生长特性 贴壁生长特征特性  注意： 据报道来自不同个体的胶质母细胞瘤细胞株U-118 MG (HTB-15) 和 U-138 MG (HTB-16)有着一致的VNTR和相近的STR模式。 U-118 MG 和 U-138 MG细胞遗传学上很相似并有至少六个衍生标记染色体。 这是1966年至1969年间J. Ponten和同事从恶性神经胶质瘤中构建的细胞株中的一株(其它包括ATCC HTB-14和 ATCC HTB-16 and ATCC HTB-17)。 1987年用BM-Cycline培养6周去除了支原体污染。 培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  优质胎牛血清，10%

PHD2形态特性  上皮样；多角生长特性 贴壁生长特征特性   培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  优质胎牛血清，10%

MUSK(Muscle Skeletal Receptor Tyrosine Kinase)|Muscle-specific Receptor Tyrosine Kinase|muscle|skeletal|receptor tyrosine kinase|skeletal receptor tyrosine-protein kinase形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞源自一名58岁患有膀胱移行细胞癌的白人男性。胞内无桥粒，有大量粗面内质网及突出绒毛，表达ras基因。 培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

C20orf104|GLEA2|Glioma expressed antigen 2|HCA58|Novel zinc finger protein|NZF|PHD finger protein 20|PHF20|Transcription factor TZP|TZP形态特性  上皮样；多角　生长特性 贴壁生长特征特性  1974年A. Leibovitz从期移行细胞瘤中建立了SW细胞株。 患者接受过术前化疗(Thiotepa)。 报道称此细胞的植板率为41%。 培养条件  L15: Leibovitz Medium  优质胎牛血清，10%

AMACR|AMACRD|CBAS4|RACE|RM|2-methylacyl-CoA racemase|alpha-methylacyl-CoA racemase|形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  COC1细胞建系于1993年（熊世钢等）。细胞于原代培养至第17天传代，以后反复传代，生物学特性稳定。可表达多种肿瘤标志物和野生型P53蛋白、突变型P53蛋白。裸鼠接种产生分化差的腺癌。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

LRP8(Low-density lipoprotein receptor-related protein 8)|APOER2|LRP-8|Apolipoprotein E receptor 2|Lr8b|MCI1|Apolipoprotein E R2形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  Z初认为这个细胞源自喉上皮癌，但随后通过同工酶分析、HeLa标记染色体和DNA指纹分析发现，该细胞已被HeLa污染；角蛋白阳性。 培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

p110 BETA|PI3 Kinase p110 beta|PI3 kinase subunit beta|PI3K|PI3K beta|PI3K p110(beta)|PI3Kbeta|PI3KCB|PIK3C1|PIK3CB|PtdIns 3 kinase subunit beta形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长　特征特性  该细胞来源于一名15岁的白人少年的肝癌组织。该细胞表达甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原、补体C4、C3激活物、纤维蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白；表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子IGFⅡ的受体；该细胞具有3-羟基-3-甲酰辅酶A还原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未证明该细胞中有HBV基因组。 培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS