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使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
参数规格：

产品名称：转基因品系大豆W98探针法qPCR试剂盒
货号:CP96984
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
​实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下是转基因品系大豆W98探针法qPCR试剂盒公司正在热销的产品：
Human MYL1(Myosin Light Chain 1, Alkali, Fast Skeletal) ELISA Kit资源名称类鼻疽杆菌种属:Malleomyces│pseudomallei提供形式:冻干物

Human NAGase(N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase) ELISA Kit资源名称类鼻疽假单胞菌种属:Pseudomonas│pseudomallei提供形式:冻干物

Human NAP(Neutrophil Alkaline Phosphatase) ELISA Kit资源名称单核细胞增生利斯特氏种属:Listeria│monocytogenes提供形式:冻干物

Human NEB(Noradrenaline Bitartas) ELISA Kit资源名称羊布氏菌种属:Brucella│melitensis提供形式:冻干物

Human NEF3(Neurofilament 3) ELISA Kit资源名称牛布氏菌种属:Brucella│abortus提供形式:冻干物

Human NPT(Neopterin) ELISA Kit资源名称绵羊布氏菌种属:Brucella│ovis提供形式:冻干物

Human N-ERC(Mesothelin) ELISA Kit资源名称犬布鲁氏菌种属:Brucella│canis提供形式:冻干物

Human NFE2L2(Nuclear Factor, Erythroid Derived 2 Like 2) ELISA Kit资源名称问号状钩端螺旋体种属:Leptospira│interrogans提供形式:冻干物

Human NFκB(Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit资源名称次要分枝杆菌种属:Mycobacterium│triviale提供形式:冻干物

Human NF-κB p65(Nuclear Factor Kappa B p65) ELISA Kit资源名称溃疡分枝杆菌种属:Mycobacterium│ulcerans提供形式:冻干物

Human NKA(Neurokinin A) ELISA Kit资源名称乡村分枝杆菌种属:Mycobacterium│Mycobacterium agreste提供形式:冻干物

Human NKB(Neurokinin B) ELISA Kit资源名称蜂房分枝杆菌种属:Mycobacterium│Mycobacterium alvei提供形式:冻干物

Human N-MID-OT(N-MID Osteocalcin) ELISA Kit资源名称戈登分枝杆菌种属:Mycobacterium│Mycobacterium gordonae提供形式:冻干物

Human NPYR1(Neuropeptide Y Receptor Y1) ELISA Kit资源名称瘰疬分枝杆菌种属:Mycobacterium│Mycobacterium scrofulaceum提供形式:冻干物

Human NPYR2(Neuropeptide Y Receptor Y2) ELISA Kit资源名称产鼻疽分支杆菌塞内加尔亚种种属:Mycobacterium│Mycobacterium farcinogenes subsp. senegalense提供形式:冻干物

Human NPYR5(Neuropeptide Y Receptor Y5) ELISA Kit资源名称鸟分枝杆菌森林土壤亚种种属:Mycobacterium│Mycobacterium avium subsp silvaticum提供形式:冻干物

Human NRG-2(Neuregulin 2) ELISA Kit资源名称海分枝杆菌种属:Mycobacterium│Mycobacterium marinum提供形式:冻干物

Human NRG-3(Neuregulin 3) ELISA Kit资源名称威斯康星米勒菌种属:Moelerella│wisconsensis提供形式:冻干物

Human NRG-4(Neuregulin 4) ELISA Kit资源名称产酸克雷伯菌种属:Klebsiella│oxytoca提供形式:冻干物

Human NT-ProANP(N-Terminal Pro Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit资源名称乌克曼枸橼酸杆菌种属:Citrobacter│werkmanii提供形式:冻干物
转基因品系大豆W98探针法qPCR试剂盒Cyclophilin F| Cyp D| CYP3| peptidylprolyl isomerase F| PPIase F| PPIF| Rotamase F形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  CA46细胞系源于Burkitt's淋巴瘤病人的腹水液，是Ｍａｇｒａｔｈ建立的系列淋巴瘤细胞系之一。该细胞系ＥＢＶ核抗原（ＥＢＮＡ）阴性，表达表面ＩｇＭ　和分泌不能与Ａ蛋白结合的ＩｇＭ，１２％的群体细胞表达补体受体，但不表达Ｆｃ受体。细胞生长的群体倍增时间是１６小时，具较快的生长速度。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

CYB5R2|NADH-cytochrome b5 reductase 2|b52形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  ACHN细胞系建系于1979年，衍生于一个患恶性肾癌的22岁男性白人病料。细胞系在MNM培养液中稳定传代150天，然后大量增殖接种裸鼠，4周后产生明显的局部浸染性肿瘤。干扰素可抑制该细胞系增殖，因此，ACHN细胞可用于人干扰素和干扰素诱导剂的抗细胞增殖研究。 培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS；1%NEAA

Fructose-bisphosphate aldolase C|Brain-type aldolase|ALDOC|ALDC形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  769-P细胞建系于1975年，衍生于一个患原发性肾细胞腺癌的58岁女性白人肾组织。该细胞呈球状，并有模糊的细胞边沿和*的核质比例。细胞连续传29代后群体倍增时间为34.8h，且能在软琼脂培养液上增殖。细胞接种免疫抑制的仓鼠颊产生实体肿瘤。 培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

36 53aa|CALNA3|CAM PRP catalytic subunit|CNA3|PPP3CC形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞来源于一位日本病人的手术切除的肿瘤组织。电镜下可以看到细胞间典型的桥粒和细胞质中大量的张力丝。1975年发现有支原体污染，而后被去除。该细胞整合有HPV16基因组，每个细胞中有1~2个拷贝。 培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

DHH|Desert hedgehog protein|HHG-3|desert hedgehog|desert hedgehog homolog形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  SK-OV-3由Trempe G和Old LJ在1973年从一位64岁白人女性卵巢腺癌患者的腹腔积液分离得到。该细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物（包括白喉毒素、顺铂和阿霉素）耐受。在裸鼠中成瘤，且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。 培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

CSNK2A1|CK2A1|casein kinase 2|alpha 1 polypeptide|casein kinase II alpha 1 subunit|CK II alpha|CK2 catalytic subunit alpha|casein kinase II subunit alpha|CKII|protein kinase CK2形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  BIU-87建系于1989年（俞莉章等）。该细胞系来源于人膀胱状移行上皮癌，通常采用5×108细胞0.2ml接种裸鼠皮下，呈进行性肿瘤生长，肿瘤结节病检与原标本癌组织相似。22代细胞群体倍增时间为34小时。细胞能在软琼脂上生长，克隆形成率23%。BIU-87细胞系对ConA，WGA，PSL均有凝集反应。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

C21orf83|PFM15|PR domain containing 15|PRDM15|Zinc finger protein 298|ZNF298形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  KG1细胞系由H.P.Koeffler和D.W.Golde建立。骨髓抽自一个59岁的患有红白血病而后又发展成急性骨髓原性白血病的男性白人。 KG1细胞在形态上类似急性髓原白血病，表现为明显的多形化，骨髓母细胞和骨髓细胞占优势。 少量细胞是成熟的粒细胞，也有微量的巨噬细胞和嗜曙红细胞。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

α-La(Alpha-Lactalbumin)形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  AN3CA细胞建系 于1964年。它衍生于子宫内膜癌患者淋巴结转移组织，具有癌细胞的基本特性，能在体外长期传代培养，接种实验动物产生明显肿瘤。但细胞的生物学特性及超微结构尚未深入研究，仅发现该细胞系促黑激素合成为阴性。细胞常用于人子宫内膜癌细胞生物学及其相关特性研究。 培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS；1%NEAA