转基因品系番茄1345-4 PCR试剂盒 返回列表页

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：

产品名称：转基因品系番茄1345-4 PCR试剂盒
货号:CP96988
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。

以下是转基因品系番茄1345-4 PCR试剂盒公司正在热销的产品：
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Human PDI(Protein Disulfide Isomerase) ELISA Kit资源名称禽腺病毒（12型）种属:Aviadenovirus│Avian adenovirus 12分离基物:病料

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Human PGAM1(PhosphoglyceRate Mutase 1) ELISA Kit资源名称牛瘟病毒种属:Morbillivirus│Rinderpest virus分离基物:病牛

Human PGD2S(Prostaglandin D2 Synthase, Brain) ELISA Kit资源名称兔出血症病毒种属:Lagovirus│Rabbit hemorrhagic disease virus分离基物:病兔

Human PGF2α(Prostaglandin F2α) ELISA Kit资源名称单核细胞增生李斯特菌种属:Listeria│monocytogenes分离基物:青贮料

Human PGRP-S(Peptidoglycan Recognition Protein-S) ELISA Kit资源名称DH5α大肠杆菌克隆菌株种属:DH5α Strain安全等级:1

Human PHB(Prohibitin) ELISA Kit资源名称灰葡萄孢（斜面）种属:Botrytis cinerea分离基物:草莓

Human PIK3Cβ(Phosphoinositide-3-Kinase Catalytic Beta Polypeptide) ELISA Kit资源名称氧化亚铁酸硫杆状菌（不提供）种属:Acidithiobacillus ferrooxidans分离基物:酸性的沥青样的煤炭矿流出物

Human PK(Pyruvate Kinase, Liver And RBC) ELISA Kit资源名称中间普氏菌种属:Prevotella intermedia分离基物:脓胸

Human PK2(Prokineticin 2) ELISA Kit资源名称特基拉芽孢杆菌种属:Bacillus tequilensis分离基物:印染废水；采集地│第二印染厂
转基因品系番茄1345-4 PCR试剂盒paraspeckle component 1|Paraspeckle protein 1|PSP1|PSPC1形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞由武汉大学基础医学院提交保藏。HCCLM3细胞广泛用于人肝癌发病机理的基础和临床研究，也可用于抗肿瘤药物筛选。 培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

GLP1R(Glucagon-like peptide 1 receptor)|GLP-1 receptor|GLP-1R|GLP-1-R形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞由武汉大学生命科学学院吴建国教授提交保藏。RD细胞可用于人横纹肌肉瘤的基础研究和临床研究。 培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

HTR1B|5-HT1B(5-hydroxytryptamine receptor 1B)|5HT1DB|HTR1D2|HTR1DB|S12|Serotonin 1D beta receptor|Serotonin receptor 1B|5-HT-1B|5-HT1DB|5-HT-1D-beta形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  该细胞由华中科技大学同济医学院免疫系龚非力教授交换保藏。Kasumi-1细胞且有人急性淋巴白血病细胞的典型特征，是研究人急性淋巴白血病的极材料。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

Lymphoid phosphatase|LYP|LYP1|LYP2|PEP|PTPN22|PTPN8形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  1971-1975年间，A. Leibovitz从结肠腺癌中分离建立十个细胞系，SW48为为其中之一。该细胞合成癌胚抗原，能在裸鼠中成瘤。 培养条件  L15: Leibovitz Medium  10%FBS　

HPTPZ|HPTPzeta|HTPZP2|phosphacan|PTP ZETA|PTP18|PTPRZ|PTPRZ1|PTPRZ2|PTPZ|R PTP zeta|R PTP zeta 2|RPTPB|RPTPbeta形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  HUT 78由A.F. Gazdar于1981年从一名53岁患有塞扎莱综合症的白人男性外周血中分离并建立。该细胞具有成熟T细胞的诱导－辅助特性。该细胞的表面能洗提出具有生物活性的IL-2。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

SAA4(Serum amyloid A-4 protein)|CSAA|C-SAA|Constitutively expressed serum amyloid A protein|SAA5|serum amyloid A4|constitutive形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞系源自一位患有横纹肌肉瘤的1岁女孩的肌肉组织，由D.J. Giard建立。 培养条件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  10%FBS　

PTGES3(Prostaglandin E synthase 3)|p23|CPGES|TEBP|cPGES|Cytosolic prostaglandin E2 synthase|Hsp90 co-chaperone|Progesterone receptor complex p23|prostaglandin E synthase 3(cytosolic)|Telomerase-binding protein p23|unactive progesterone receptor|23 kD形态特性  成纤维细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞是一株人黑色素瘤细胞系。可用于建立动物研究模型。 培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

Qprt|quinolinate phosphoribosyltransferase|NADC|QPRTase|nicotinate-nucleotide pyrophosphorylase [carboxylating]|nicotinate-nucleotide pyrophosphorylase (carboxylating)形态特性  成纤维细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞源于一位54岁女性黑色素瘤患者的皮肤组织，由Giard DJ建系。其染色体为超三倍体，带有62条染色体。其中九条标志染色体普遍存在于A375细胞中，而普通染色体N2, N6和N22在细胞中只有一条。 培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS