转基因品系番茄1345-4探针法qPCR试剂盒 返回列表页

参数规格：

产品名称：转基因品系番茄1345-4探针法qPCR试剂盒
货号:CP96990
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

以下是转基因品系番茄1345-4探针法qPCR试剂盒公司正在热销的产品：
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Human PRB1(Basic Salivary Proline Rich Protein 1) ELISA Kit资源名称产黑普雷沃氏菌种属:Prevotella│melaninogenica分离基物:唾液

Human PRB2(Basic Salivary Proline Rich Protein 2) ELISA Kit资源名称中华石花菌种属:Mycogelidium│sinense分离基物:子实体组织

Human PRCP(Prolylcarboxypeptidase) ELISA Kit资源名称红色毛癣菌种属:Trichophyton rubrum安全等级:1

Human PRELP(Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein) ELISA Kit资源名称乳酸杆菌种属:Lactobacillus│分离基物:健康孕妇道分泌物

Human Preptin(Preptin) ELISA Kit资源名称假坚强芽孢杆菌（暂无）种属:Bacillus pseudofirmus提供形式:冻干物/斜面

Human PRKG1(Protein Kinase, cGMP Dependent Type I) ELISA Kit资源名称戴氏菌种属:Dyella│sp.分离基物:土壤

Human Pro-ADM(Proadrenomedullin) ELISA Kit资源名称百日咳鲍特菌种属:Bordetella pertussis提供形式:冻干粉

Human ProGRP(Pro-Gastrin Releasing Peptide) ELISA Kit资源名称致病性大肠埃希菌种属:Escherichia│coli提供形式:冻干物

Human pro-IL1β(pro interleukin 1 beta) ELISA Kit资源名称热纤梭菌种属:Clostridium thermocellum提供形式:冻干物

Human Pro-MMP-1(pro-Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit资源名称云芝栓孔菌（斜面）种属:Trametes versicolor提供形式:斜面培养物
转基因品系番茄1345-4探针法qPCR试剂盒WNT5A|hWNT5A(Protein Wnt-5a)|wingless-type MMTV integration site family|member 5A|WNT-5A protein形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

PTPRQ(Phosphotidylinositol phosphatase PTPRQ)|PTP-RQ|R-PTP-Q|Receptor-type tyrosine-protein phosphatase Q形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  该细胞属藏，其特征特性尚未公开。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

RALB|Ras related protein Ral B形态特性  淋巴母细胞样生长特性 悬浮生长特征特性  该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

VIM(Vimentin)形态特性  淋巴母细胞样　生长特性 悬浮生长特征特性  该细胞属利保藏，其特征特性尚未公开。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

Multidrug resistance-associated protein 4|ATP-binding cassette sub-family C member 4|MRP/cMOAT-related ABC transporter|Multi-specific organic anion transporter B|MOAT-B|ABCC4|MRP4形态特性  淋巴母细胞样　生长特性 悬浮生长特征特性  该细胞属藏，其特征特性尚未公开。 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

GTP binding protein smg p21B|K REV|RAL1B|RAP1B|Ras related protein Rap 1b形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS

Multidrug resistance-associated protein 6|ATP-binding cassette sub-family C member 6|Anthracycline resistance-associated protein|Multi-specific organic anion transporter E|MOAT-E|ABCC6|ARA|MRP6形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性  该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

Multidrug resistance-associated protein 9|ATP-binding cassette sub-family C member 12|ABCC12|MRP9形态特性  上皮细胞样生长特性 贴壁生长、悬浮生长均有特征特性  该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS