50T-转基因品系大豆G94-1探针法qPCR试剂盒-上海莼试生物技术有限公司

使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
参数规格：

产品名称：转基因品系大豆G94-1探针法qPCR试剂盒
货号:CP96969
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶（2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下是转基因品系大豆G94-1探针法qPCR试剂盒公司正在热销的产品：
Human CHRM2(Cholinergic Receptor, Muscarinic 2) ELISA Kit资源名称堪萨斯分枝杆菌种属:Mycobacterium│kansasii提供形式:冻干物

Human CK-13/KRT13(CytokeRatin 13) ELISA Kit资源名称牛分枝杆菌牛型亚种种属:Mycobacterium│Mycobacterium bovis subsp bovis提供形式:冻干物

Human CK-18/KRT18(CytokeRatin 18) ELISA Kit资源名称龟分枝杆菌龟脓肿亚种种属:Mycobacterium│chclonae subsp. Abscessus提供形式:冻干物

Human CK-20/KRT20(CytokeRatin 20) ELISA Kit资源名称柯氏柠檬酸杆菌种属:Citrobacter│koseri提供形式:冻干物

Human CKLF(Chemokine Like Factor) ELISA Kit资源名称猪鼻支原体种属:Mycoplasma│hyorhinis分离基物:猪呼吸道

Human CKLFSF6(Chemokine Like Factor Superfamily 6) ELISA Kit资源名称犬传染性肝炎病毒种属:Mastaadenovirus│Infectious canine hepatitis virus分离基物:新生仔犬，肝

Human CKMT1A(Creatine Kinase, Mitochondrial 1A) ELISA Kit资源名称胸膜肺炎放线杆菌种属:Actinobacillus│pleuropneumoniae分离基物:病猪内脏

Human CLDN1(Claudin 1) ELISA Kit资源名称鸡伤寒沙门氏菌种属:Salmonella│gallinarum分离基物:肉鸡盲肠

Human CLDN11(Claudin 11) ELISA Kit资源名称Nakamurella lactea种属:Nakamurella│lactea提供形式:冻干物

Human CLDN4(Claudin 4) ELISA Kit资源名称Purpureocillium sp.种属:Purpureocillium│sp.分离基物:土壤

Human CLDN5(Claudin 5) ELISA Kit资源名称澳大利亚糖丝菌种属:Sacchardthrix│australienis提供形式:冻干物

Human CLDN9(Claudin 9) ELISA Kit资源名称大肠埃希氏菌DH5a/EcsecA N68种属:Escherichia│coli提供形式:斜面培养物

Human CLL1(Collectin Liver 1) ELISA Kit资源名称大肠埃希氏菌DH5a/T/TBsecA2种属:Escherichia│coli提供形式:斜面培养物

Human CMLC-1(Cardiac Myosin Light Chains 1) ELISA Kit资源名称黑粉菌属种属:Ustilago│sp.提供形式:冻干物

Human c-myc(c-myc Oncogene Product) ELISA Kit资源名称红螺菌属菌种种属:Phaeospirillum│sp.分离基物:土壤

Human CNR1(Cannabinoid Receptor 1, Brain) ELISA Kit资源名称啤酒酵母种属:Saccharomyces│cerevisiae提供形式:斜面培养物

Human CNTN4(Contactin 4) ELISA Kit资源名称茄病镰刀菌蓝色变种种属:Fusarium│solani var.coeruleum分离基物:人参根部土壤

Human CNTNAP2(Contactin Associated Protein Like Protein 2) ELISA Kit资源名称胁状拟内孢霉种属:Endomycopsis│fibuliger提供形式:斜面培养物

Human CNX(Calnexin) ELISA Kit资源名称须壳孢属种属:Pyrenochaeta│sp.提供形式:斜面培养物

Human COL11α1(Collagen Type XI Alpha 1) ELISA Kit资源名称芽枝孢霉属种属:Cladosporium│sp.分离基物:根
转基因品系大豆G94-1探针法qPCR试剂盒MYB binding protein (P160) 1a|Myb binding protein 1A|MYBBP1A|P160|PAP2形态特性上皮样生长特性贴壁生长特征特性培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清，10%

XOD(Xanthine Oxidase)|XDH|XDHA|Xanthine dehydrogenase|oxidase形态特性上皮细胞生长特性贴壁生长　特征特性 22RV1是来自异种移植(在阉割引起前列腺癌衰退又在其父亲的雄性激素信赖型CWR22嫁接后复发的小鼠中连续传代)的人前列腺癌上皮细胞系。此细胞系表达前列腺特异抗原。二羟基脂酮轻微刺激细胞生长，经western blot检测溶解产物与抗雄性激素受体抗体起免疫反应。 EGF刺激细胞生长，但TGFβ-1不能抑制细胞生长。该细胞在裸鼠中成瘤。培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 优质胎牛血清，10%

FOXO3(Forkhead box protein O3)|AF6q21|FKHRL1|FKHRL1P2|FOXO3A|forkhead box O3|Forkhead in rhabdomyosarcoma-like 1形态特性上皮细胞生长特性贴壁生长特征特性 SW620是从一个51岁男性白人组织中分离得到。由A.Leibovitz等从一个淋巴结建株。细胞系主要由无绒毛的小园球细胞和双极细胞组成。它仅合成少量癌胚抗原（CEA）且在裸鼠中有高度的致瘤性。培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 优质胎牛血清，10%

hypothetical protein MGC29506| MZB1| PACAP| pERp1形态特性上皮样生长特性贴壁生长特征特性该细胞系1957年由T.U.Sample等从患有结肠癌的70岁男性白人的腹水分离。该病人在取腹水样品前已用5-氟尿嘧啶治疗4-6周。角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 优质胎牛血清，10%