大麦内标准PKABA1基因染料法PCR试剂盒 返回列表页

使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
参数规格：

产品名称：大麦内标准PKABA1基因染料法PCR试剂盒
货号:CP96881
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
​实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下是大麦内标准PKABA1基因染料法PCR试剂盒公司正在热销的产品：
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Chicken IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit资源名称柱状假丝酵母种属:Candida cylindracea提供形式:冻干物

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Chicken IL-3(Interleukin 3) ELISA Kit资源名称阿伯丁沙门氏菌种属:Salmonella aberdeen提供形式:冻干物

Chicken IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit资源名称千叶类芽胞杆菌种属:Paenibacilluschibensis分离基物:土壤

Chicken IL-5(Interleukin 5) ELISA Kit资源名称腐皮镰孢菌（斜面）种属:Fusarium solani分离基物:苹果烂根

Chicken IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit资源名称蓝色犁头霉种属:Absidia│coerulea提供形式:冻干物

Chicken IL-8(Interleukin 8) ELISA Kit资源名称模仿葡萄球菌种属:Staphylococcus simulans提供形式:冻干粉、斜面

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Chicken LHRH/GnRH(Luteinizing Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit资源名称葡萄汁有孢汉逊酵母种属:Hanseniaspora uvarum分离基物:苹果

Chicken LIF(Leukemia Inhibitory Factor) ELISA Kit资源名称高地芽胞杆菌种属:Bacillus altitudinis分离基物:红树林土壤

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Chicken NT-3(Neurotrophin-3) ELISA Kit资源名称沼泽红假单胞菌（菌液）（暂无）种属:Rhodopseudomonas palustris提供形式:仅提供菌液

Chicken OPG(Osteoprotegerin) ELISA Kit资源名称肠致病性大肠埃希氏菌种属:Escherichia coli O157分离基物:腹泻病例粪便标本

Chicken Pg(Progesterone) ELISA Kit资源名称金黄色葡萄球菌亚种种属:Staphylococcus aureus subsp.aureus Rosenbach分离基物:临床分离

Chicken S100A6(S100 Calcium Binding Protein A6) ELISA Kit资源名称具核梭杆菌聚核亚种种属:Fusobacterium nucleatum subsp nucleatum提供形式:冻干粉

Chicken SCF(Stem Cell Factor) ELISA Kit资源名称巴氏芽孢杆菌种属:Bacillus pasteurii提供形式:冻干粉

Chicken TIMP-2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit资源名称艰难梭菌种属:Clostridium difficile提供形式:冻干物
大麦内标准PKABA1基因染料法PCR试剂盒Apo B 100|Apo B 48|APOB|ApoB100|Apolipoprotein B|Apolipoprotein B 100|FLDB3%碱性蛋白胨水产品用途：3%碱性蛋白胨水用于嗜盐性细菌特别是副溶血性弧菌及创伤弧菌的前增菌培养。(GB)产品规格：10mlX20支冷藏：2-8℃

ANF|ANP|ATFB6|Atrial natriuretic factor|Atrial natriuretic peptide|CDD ANF|CDP|NPPA|PND|Prepronatriodilatin弧菌显色琼脂培养基平板产品用途：弧菌显色琼脂培养基平板用于水产品及食物中毒样品中弧菌特别是副溶血性弧菌的分离和初步鉴别。(GB、SN)产品规格;90mmX20个冷藏：2-8℃

BNP|BNP(1 32)|Natriuretic peptides B|NPPBBolton肉汤产品用途：Bolton肉汤用于空肠弯曲杆菌的选择性增菌。(GB)产品规格：100mlX6瓶冷藏：2-8℃

NT-proBNP|N-Terminal Pro-Brain Natriuretic PeptideBolton肉汤(含羊血)产品用途：Bolton肉汤用于空肠弯曲杆菌的选择性增菌。(GB)产品规格：225mlX6瓶冷藏：2-8℃

T3|Triiodothyronine改良CCD琼脂平板产品用途：改良CCD琼脂平板用于空肠弯曲杆菌的选择性分离培养。(GB)规格：90mmX20个冷藏：2-8℃

T4|ThyroxineSkirrow琼脂平板产品用途：Skirrow琼脂平板用于空肠弯曲杆菌的选择性分离培养。(GB)规格：90mmX20个冷藏：2-8℃

FSH(Follicle-Stimulating Hormone)改良磷酸盐缓冲液(PSB)产品用途：改良磷酸盐缓冲液(PSB)用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的增菌培养。(GB、ISO)规格：225mlX6瓶冷藏：2-8℃

LH(Luteinizing Hormone)|Lutropin|LutrophinCIN-1琼脂平板产品用途：CIN-1琼脂平板用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的选择性分离培养。(GB)规格：90mmX20个冷藏：2-8℃