液相色谱流动相是液体，对组分有亲合力，并参与固定相对组分的竞争，正确选择流动相溶剂直接影响样品组分的分离。

　　一、溶剂对于待测样品必须具有合适的极性和良好的选择性。

　　二、溶剂与检测器匹配：

　　对于紫外吸收检测器，不能用对紫外光有吸收的溶剂。

　　对于示差折光检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达到高灵敏度。

　　三、高纯度：

　　由于液相色谱灵敏度高，对流动相溶剂的纯度要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳或产生假峰。

　　四、化学稳定性好。

　　五、粘度适中：

　　若溶剂粘度高，会增高压力，不利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等。

　　粘度过低的溶剂不宜采用，如戊烷等，它们容易在色谱柱和检测器内形成气泡，影响分离。

　　液相色谱仪的梯度洗脱是指在同一个色谱分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比。梯度洗脱又称梯度淋洗或程序洗脱。

　　一、梯度洗脱类型：

　　1、高压梯度：采用两台高压输液泵，分别按设定的比例输送A和B两种溶液至混合器，混合器在泵之后，两种溶液在高压状态下混合。

　　2、低压梯度：只需一台高压输液泵，比例阀在泵之前，溶液在常压（低压）下混合。

　　二、梯度洗脱实质：

　　通过不断地变化流动相的配比和极性来调整混合样品中各组分的k值，使所有色谱带都以平均k值通过液相色谱仪色谱柱。梯度洗脱在液相色谱仪中所起的作用相当于气相色谱仪中的程序升温，所不同的是，在梯度洗脱中样品k值的变化是通过流动相的极性、PH值和离子强度改变来实现的，而不是通过改变温度（温度程序）来实现。