线粒体蛋白提取试剂盒100T实验方法 返回列表页

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线粒体蛋白提取试剂盒100T实验方法储存条件：线粒体试剂AB于2-8℃保存，*存放于-20℃保存；蛋白裂解液室温保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。

有效期：一年。

产品简介：

线粒体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

线粒体蛋白提取试剂盒100T实验方法实验操作步骤：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ，其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每50～100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液（5 ×），混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置：
    把试剂盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中，稀释至10uM ，处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ，进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞，通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会*丧失，JC-1 染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞，CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞：
（1）取 10～60 万细胞，重悬于 0.5mL 细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
（3）在孵育期间，按照每 1mL JC-1 染色缓冲液（5×）加入 4mL 蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 染色缓冲液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育结束后，600g 4 ℃离心3 ～4 分钟，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
（5）用JC-1 染色缓冲液（1×）洗涤 2 次：加入 1mL JC-1 染色缓冲液（1×）重悬细胞，600g 4 ℃离心3～4 分钟，沉淀细胞，弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液（1×）重悬细胞，600g 4 ℃离心 3～4 分钟，沉淀细胞，弃上清。
（6）再用适量 JC-1 染色缓冲液（1×）重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
线粒体蛋白提取试剂盒100T实验方法注意事项
（1）本试剂只适用于实验，不适用于临床检测；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙锭）有毒性，能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用，使用时需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。在处理和标记时，尽可能在暗处进行。在孵育阶段，用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后，在暗室内用显微镜观察；
（4）整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作，以免影响细胞状态。
（5）在细胞洗涤的后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果。
（6）为防止荧光衰变，宜在1小时内进行流式检测。
（7）PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首*行Annexin V-FITC染色，短可在上机前5分钟再加入PI染色。
西兰花 Brassica oleracea L. var. botrytis L. Sulforaphane 萝卜硫素 4478-93-7 C6H11NOS2 ≥98%

姜皇速CurcuminHPLC≥98%;20mg/支

拟人参皂苷-Rh2 3-O-β-D-glucopyranosyl-3β,12β,25-trixy7noxyldammar-(E)-20(22... 1370264-16-6 20mg HPLC≥98% 用于含量测定

对照品头孢羟安苄0431-9501含量测定

Pelargonidin
220127-57-1 甲磺酸*标准品(-20℃) 100mg

相思子Abrus precatorius 红豆减 21339-55-9 C12H14N2O2 ≥98% 乙二醇本迷(P0950000

Sarcandrolide D 1207185-03-2

metxysergide 马来酸美西卖角标准品129-49-7 350mg马来酸美西卖角标准品

女贞苷 260413-62-5 HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
长春花 Catharanthus roseus (L.)G.Don Vincristine sulfate 长春新碱 2068-78-2 C46H56N4O10 .H2O4S ≥98%

异去轻钩藤减Isocorynoxqinq21014-9-020mg

人参皂苷Rg1;人参皂甙Rg1 Ginsenoside Rg1 22427-39-0 20mg HPLC≥98% 用于含量测定

含量测定* 100991-200901常温，避光100mg

滨蒿内酯;6,7-二甲氧基;七叶内酯二甲醚;蒿属香豆精;东喘宁 Scoparone;6,7-Dimetxoxycoumarin 120-08-1 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
大鼠细胞色素P450(CYP450)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

人*原I 免疫试剂盒 Human Pepsinogen I ELISA Kit

乳酸脱氢酶(LDH)测试盒 可见分光光度法 50管/24样

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