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植物线粒体膜蛋白提取试剂盒50T使用说明书使用注意事项
1.微量试剂取用前请离心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿*、戴手套等。
4.本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不*用于检测组织样本。
产品名称:植物线粒体膜蛋白提取试剂盒50T使用说明书
储存条件:蛋白酶抑制剂-20℃保存; 提取液2-8℃保存;膜蛋白溶解液室温保存。
有效期:一年。
产品简介:
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器,细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞活动之需。跨膜蛋白承担各种生物功能,在生物的各种发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套,因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
植物线粒体膜蛋白提取试剂盒50T使用说明书操作方法
1.悬浮细胞离心(2000rpm离心5min)收集;贴壁细胞用*消化收集用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1~5×105细胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混匀;室温、避光、反应5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞;
4.请在1 hour内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A.荧光显微镜观察
1.滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;
2.对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;
(1)将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;
(2)用PBS洗涤细胞两次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混匀;
(4)将上述溶液滴加于盖玻片表面,使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖;
(5)避光、室温反应5 min。
3.将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下观察激发波长546nm,发射波长647 nm,7-AAD荧光信号呈红色。
B.流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测,激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm。
7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。
植物线粒体膜蛋白提取试剂盒50T使用说明书实验步骤
贴壁细胞需用0.25%的*消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的*消化时,注意必须*清除EDTA:在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。
(1)用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer;
(2)细胞收集。悬浮细胞收集:离心5分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合),于室温2000rpm离心5~10分钟,收集细胞;
(3)细胞洗涤:用预冷1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm离心5~10分钟,洗涤细胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞;
(5)Annexin V-FITC标记:加入5μL的Annexin V-FITC混匀后,避光,室温孵育15分钟;
(6)PI标记:上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
(7)上机前,补加200μL的1×Binding Buffer。
云南草蔻Alpinia blepharocalyx 5,7,4'-Tri-O-metxylcatechin 5,7,4'-三-O-甲基儿茶精 105330-59-4 C18H20O6 ≥95%
秦皮速cqsculinHPLC≥98%,20mg/支
桔梗皂苷D2;桔梗皂甙D2 Platycodin D2 66663-90-9 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
含量测定盐酸扶*100844-200802常温,避光100mg
风信子素;2-(1-乙氧代乙氧代)乙基本 2-(1-Ethoxyethox
24757-70-8 克拉曲滨相关物质A标准品 20mg
诃黎勒鞣花酸 23094-71-5 C41H30O27 ≥98% 左卡泥汀杂质A;肉毒减杂质A(L0 99905
磺菌安标准品 扶噻甲草酯标准品 扶酰安标准品
*杂质Q标准品118074-07-010mg*杂质Q标准品
*B 6199-67-3 HPLC≥95%;20mg 订购|咨询
楤木 Aralia 2g
异补骨脂速Isopsoralen23-20-HPLC≥98%,20mg/vial
etxyllucidone (2Z)-2-[(2E)-1-乙氧基-3-本基-2-丙烯-1-亚基]-4-甲氧基-4-环烯-1,3-二同 1195233-59-0
京尼平苷栀子苷24512-63-8Geniposide
异绿原酸B;3,4-二酰奎宁酸 Isochlorogenic acid B;3,4-Dicaffeoylinoneic acid 14534-61-3 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
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HumanParkinsondisease2parkin,Park2ELISAKit人帕金森氏病2Parkin(Park2)ELISA试剂盒规格:96T/48T
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