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DNA 非变性 PAGE 上样液1.5mL运输

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更新时间:2017-07-14 12:34:30浏览次数:111次

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DNA 非变性 PAGE 上样液1.5mL运输使用方法 一、准备工作 1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。 2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1X 电泳缓冲液待用。

DNA 非变性 PAGE 上样液1.5mL运输产品及特点:
尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是单独 配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点: 1. 一站式,含有电泳所需要的所有试剂,即开即用,十分方便,免去了 实验人员称取有毒物品。 2. 灵活,可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE,以便对长度各异 RNA 进行电泳。 3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交和放射自 显影等。 4. 使用新型缓冲液,可以防止甘油的干扰。
DNA 非变性 PAGE 上样液1.5mL运输详细介绍:

DNA 非变性 PAGE 上样液1.5mL运输使用方法:
一、准备工作
1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1X 电泳缓 冲液待用。
3. 配制 10%过硫酸铵溶液 精确称取约 100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中,按每 1 mg 过硫酸铵加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,摇晃致溶, 立即使用。注意:放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积,一般配制一块 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液,配制一块 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的胶 需要 120 mL 凝胶溶液。
2. 新鲜的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液的配制:在装有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入约 130 mL 自备的去离子水,然后将全部甲叉双丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有 毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低,不会溶解在这少量溶液中)。充 分摇晃混匀后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
3. 根据所需要的凝胶溶液的体积,在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分
4. 搅拌并加热到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷却到室温后,将三角瓶接上真空系统抽真空处理 10-15 分钟以充分去 除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限,此 步也可以省略。
6. 边摇晃溶液变加入 50 uL TEMED 500 uL 10%过硫酸铵。注意:即 使选择其他工作浓度的 Acrylamide/BisTEMED 10%过硫酸铵的用 量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化,TEMED 10%过硫酸铵的用量也要按比例改变。
7. 再充分摇晃约 30 秒后迅速灌胶,然后插入样品梳。
8. 室温放置 30-60 分钟使胶凝固。
9. 将凝胶板放置在电泳装置上后,在上下层分别加入适当量的 1X 电泳缓冲 液。如果不马上使用,需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
10. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液,充分将每个加样空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。
DNA 非变性 PAGE 上样液1.5mL运输后续处理:
1. 染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的 凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天泽基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下观察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后进行胶回收处理。
3. Northern 杂交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。
4. 放射自显影:如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的 玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保 鲜膜,真空抽干,然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。
CM-M040小鼠肝窦内皮细胞*培养基100mL

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/UT31413II/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照)

卵巢上皮细胞培养基OEpiCM

MRC-5细胞,人正常胚肺成纤维细胞 人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移),KP-N-NS细胞 人脉络丛成纤维细胞HCPF

猪细胞;ST

PDCD1LG2 Others Human PD-L2 / B7-DC / CD273 人细胞裂解液 (阳性对照)
TNFRSF11A Others Rat 大鼠 TNFRSF11A 人细胞裂解液 (阳性对照)

人滑膜细胞cDNAHS cDNA

人内脏脂肪细胞*培养基 100mL

RLE-6TN细胞,大鼠肺上皮Ⅱ型细胞 PC-3(人前列腺癌细胞) 大鼠肝细胞;BRL 3A

EFNB2 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签)

16HBE(人支气管上皮样细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞;SH3
人滑膜细胞cDNAHS cDNA

TNFRSF11A Others Rat 大鼠 TNFRSF11A 人细胞裂解液 (阳性对照)

人内脏脂肪细胞*培养基 100mL

RLE-6TN细胞,大鼠肺上皮Ⅱ型细胞 PC-3(人前列腺癌细胞) 大鼠肝细胞;BRL 3A

EFNB2 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签)

16HBE(人支气管上皮样细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞;SH3
Anti-Phospho-SirT1 (Ser27)/FITC 荧光素标记磷酸化沉默调节蛋白1抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml

Bcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原)Multi-class antibodies规格: 0.5mg

一氧化氮合成酶-1抗体 Anti-NOS-1/bNOS/neuronal NOS/nNOS 0.1ml

5-HTR1B 英文名称: 5-羟色胺受体1B抗体 0.1ml

FAM62B 英文名称: 延伸突触蛋白2抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-P53(Ser9) 磷酸化抑制基因P53抗体 规格 0.1ml

Bcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原)Multi-class antibodies规格: 0.5mg
Rabbit Anti-horse IgM/Cy3 Cy3标记的兔抗马IgM 0.1ml

FABPB 英文名称: 脑型脂肪酸结合蛋白抗体 0.2ml

c-erbB-2抗体 Anti-C-erbB-2 0.1ml

Anti-Phospho-delta Opioid Receptor (Ser363) /FITC 荧光素标记磷酸化D型受体抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PKMYT1 髓鞘转录因子1激酶抗体 规格 0.1ml

Rabbit Anti-mouse IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记兔抗小鼠IgGMulti-class antibodies规格: 0.1ml
DNA 非变性 PAGE 上样液1.5mL运输IL-16 大鼠白介素-16Multi-class antibodies规格: 48T

Anti-Defensin Beta 1 防御素β1抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Necdin 生长抑制蛋白NDN抗体 规格 0.2ml

Human D-Dimer,D2D ELISA Kit D二聚体 96T

SPG7 英文名称: 痉挛性截瘫蛋白7/基质细胞粘附调节蛋白抗体 0.2ml

CYP21 英文名称: *21-羟化酶抗体 0.2ml

Anti-Defensin Beta 1 防御素β1抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml

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