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绿如兰核酸染料 ( 可见光型 )10mL保存

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更新时间:2017-07-14 12:37:56浏览次数:126次

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绿如兰核酸染料 ( 可见光型 )10mL保存使用方法 一、准备工作 1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。 2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1X 电泳缓冲液待用。

绿如兰核酸染料 ( 可见光型 )10mL保存产品及特点:

尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是单独 配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点: 1. 一站式,含有电泳所需要的所有试剂,即开即用,十分方便,免去了 实验人员称取有毒物品。 2. 灵活,可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE,以便对长度各异 RNA 进行电泳。 3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交和放射自 显影等。 4. 使用新型缓冲液,可以防止甘油的干扰。
绿如兰核酸染料 ( 可见光型 )10mL保存使用方法:
一、准备工作
1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1X 电泳缓 冲液待用。
3. 配制 10%过硫酸铵溶液 精确称取约 100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中,按每 1 mg 过硫酸铵加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,摇晃致溶, 立即使用。注意:放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积,一般配制一块 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液,配制一块 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的胶 需要 120 mL 凝胶溶液。
2. 新鲜的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液的配制:在装有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入约 130 mL 自备的去离子水,然后将全部甲叉双丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有 毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低,不会溶解在这少量溶液中)。充 分摇晃混匀后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
3. 根据所需要的凝胶溶液的体积,在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分
4. 搅拌并加热到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷却到室温后,将三角瓶接上真空系统抽真空处理 10-15 分钟以充分去 除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限,此 步也可以省略。
6. 边摇晃溶液变加入 50 uL TEMED 500 uL 10%过硫酸铵。注意:即 使选择其他工作浓度的 Acrylamide/BisTEMED 10%过硫酸铵的用 量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化,TEMED 10%过硫酸铵的用量也要按比例改变。
7. 再充分摇晃约 30 秒后迅速灌胶,然后插入样品梳。
8. 室温放置 30-60 分钟使胶凝固。
9. 将凝胶板放置在电泳装置上后,在上下层分别加入适当量的 1X 电泳缓冲 液。如果不马上使用,需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
10. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液,充分将每个加样空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。
绿如兰核酸染料 ( 可见光型 )10mL保存后续处理:
1. 染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的 凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天泽基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下观察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后进行胶回收处理。
3. Northern 杂交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。
4. 放射自显影:如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的 玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保 鲜膜,真空抽干,然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。
前脂肪细胞分化培养基PADM-prf

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMYF

大鼠肝细胞瘤;H-4-II-E 红白细胞白血病细胞,HEL299细胞 PT67细胞,鼠逆转录酶病毒包装细胞

JEC, 人子宫内膜腺癌细胞系 Human

LRP1 Others Human LRP1 / A2MR / CD91 (aa 786-1165) 人细胞裂解液 (阳性对照)
SPN Others Mouse 小鼠 SPN / CD43 人细胞裂解液 (阳性对照)

人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4

EJ 人膀胱癌细胞

SW1116人结肠腺癌细胞 SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培养基(GIBCO)+10%FBS

CD70 Protein Rat 重组大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 标签)

人脂肪细胞-内脏(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC来源), 人癌细胞 Human
人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4

FGFR1 Others Human FGFR1 / CD331 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

CM-H110人皮肤肥大细胞*培养基100mL

5-8F, 人高转移鼻咽癌细胞系 淋巴瘤,EL4IL-2细胞 PC-12(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤)

小鼠浆细胞瘤;MPC-11

PDGFRB Others Human CD140b / PDGFRB 人细胞裂解液 (阳性对照)
Anti-TIMP-2/FITC 荧光素标记金属蛋白酶组织抑制因子-2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml

Bak(BCL2 homologous antagonist/killer) Bcl-2同源拮抗剂Bak(多肽)Multi-class antibodies规格: 0.2mg

滑膜细胞凋亡抑制物1抗体 Anti-SYVN1 hu rat mo cattle 0.2ml

Phospho-Stathmin(Ser25) 英文名称: 磷酸化原癌基因蛋白18 0.1ml

EPS8 英文名称: 表皮生长因子受体底物8抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-LRP6(Thr1479) 磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6抗体 规格 0.1ml

Bak(BCL2 homologous antagonist/killer) Bcl-2同源拮抗剂Bak(多肽)Multi-class antibodies规格: 0.2mg
Goat Anti-Bovine IgG/Cy5 Cy5标记的羊抗IgG 0.1ml

FGF3 英文名称: 纤维母细胞生长因子3抗体 0.1ml

周期素依赖性激酶6抗体 Anti-CDK6 0.2ml

Anti-OCT2 /FITC 荧光素标记阳离子转运蛋白2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh plant lectin B4/IB4 植物凝集素IB4 规格 0.2ml

Rabbit Anti-horse IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记兔抗马IgGMulti-class antibodies规格: 0.1ml
绿如兰核酸染料 ( 可见光型 )10mL保存Ret IgM ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白MMulti-class antibodies规格: 48T

Anti-phospho-Ephrin B (Tyr324/329) 磷酸化Ephrin B抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh MTTP 微粒体甘油三酯转运蛋白 规格 0.2ml

SAP(Human Serum amyloid P) ELISA Kit 人血清淀粉样蛋白P 96T

SPDEF 英文名称: 上皮特异性ETs转录因子抗体 0.1ml

CARD6 英文名称: 凋亡加强结构域蛋白6抗体 0.2ml

Anti-phospho-Ephrin B (Tyr324/329) 磷酸化Ephrin B抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml

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