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96 孔板 PCR 片段纯化回收试剂盒 ( 离心法 )1次运输详细介绍:
96 孔板 PCR 片段纯化回收试剂盒 ( 离心法 )1次运输产品及特点:
尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是单独 配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点: 1. 一站式,含有电泳所需要的所有试剂,即开即用,十分方便,免去了 实验人员称取有毒物品。 2. 灵活,可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE,以便对长度各异 的 RNA 进行电泳。 3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交和放射自 显影等。 4. 使用新型缓冲液,可以防止甘油的干扰。
96 孔板 PCR 片段纯化回收试剂盒 ( 离心法 )1次运输使用方法:
一、准备工作
1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1X 电泳缓 冲液待用。
3. 配制 10%过硫酸铵溶液 精确称取约 100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中,按每 1 mg 过硫酸铵加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,摇晃致溶, 立即使用。注意:放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积,一般配制一块 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液,配制一块 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的胶 需要 120 mL 凝胶溶液。
2. 新鲜的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液的配制:在装有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入约 130 mL 自备的去离子水,然后将全部甲叉双丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有 毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低,不会溶解在这少量溶液中)。充 分摇晃混匀后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
3. 根据所需要的凝胶溶液的体积,在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分
4. 搅拌并加热到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷却到室温后,将三角瓶接上真空系统抽真空处理 10-15 分钟以充分去 除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限,此 步也可以省略。
6. 边摇晃溶液变加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%过硫酸铵。注意:即 使选择其他工作浓度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%过硫酸铵的用 量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化,TEMED 和 10%过硫酸铵的用量也要按比例改变。
7. 再充分摇晃约 30 秒后迅速灌胶,然后插入样品梳。
8. 室温放置 30-60 分钟使胶凝固。
9. 将凝胶板放置在电泳装置上后,在上下层分别加入适当量的 1X 电泳缓冲 液。如果不马上使用,需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
10. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液,充分将每个加样空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。
96 孔板 PCR 片段纯化回收试剂盒 ( 离心法 )1次运输后续处理:
1. 染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的 凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天泽基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下观察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后进行胶回收处理。
3. Northern 杂交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。
4. 放射自显影:如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的 玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保 鲜膜,真空抽干,然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。
人骨骼肌成肌细胞cDNAHSkMM cDNA
GPNMB Others Human 人 GPNMB / HGFIN 人细胞裂解液 (阳性对照)
3T3?L1 小鼠脂肪细胞
CL-0246YAC-1(小鼠淋巴瘤细胞)5×106cells/瓶×2
rCF, 大鼠心脏成纤维细胞
稳定表达EBNA1的人胚肾细胞;293E 人肾皮层上皮细胞*培养基 100mL
IGFBP6 Others Human 人 IGFBP6 / IBP-6 人细胞裂解液 (阳性对照)
人口腔角质细胞裂解物HOKL
BRL-3A 大鼠正常肝细胞
CL-0118HT-29(人结肠癌细胞)5×106cells/瓶×2
人绒毛间充质成纤维细胞
人肝永生化细胞;THLE-3 人心脏微血管内皮细胞*培养基 100mL
人口腔角质细胞裂解物HOKL
IGFBP6 Others Human 人 IGFBP6 / IBP-6 人细胞裂解液 (阳性对照)
BRL-3A 大鼠正常肝细胞
CL-0118HT-29(人结肠癌细胞)5×106cells/瓶×2
人绒毛间充质成纤维细胞
人肝永生化细胞;THLE-3 人心脏微血管内皮细胞*培养基 100mL
Lp-PL-A2 ELISA Kit 大鼠脂蛋白磷脂酶A2Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-Zyxin/ESP 2 斑联蛋白抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FSH receptor 促卵泡刺激素受体抗体 规格 0.1ml
IGFBP-4(Human insulin-like growth factors binding protein 4) ELISA Kit 人胰岛素样生长因子结合蛋白4 96T
NSE 英文名称: 神经元特异性烯醇化酶/γ 烯醇化酶抗体 0.1ml
phospho-APC6 (Thr580) 英文名称: 磷酸化细胞分裂周期蛋白16抗体 0.1ml
Anti-Zyxin/ESP 2 斑联蛋白抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的羊抗豚鼠IgG 0.1ml
FOLH1B 英文名称: 细胞生长抑制蛋白26/前列腺特异性膜抗原样蛋白抗体 0.2ml
CC趋化因子受体1抗体 Anti-CCR-1 0.2ml
Anti-NP/FITC 荧光素标记任基酚抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PNPLA6/NTE 含patatin样磷脂酶6抗体 规格 0.1ml
Anti-Gentamicin Monoclonal Antibody /Gold 胶体金离子标记小鼠抗*单克隆抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.5ml(35nm-40nm)
96 孔板 PCR 片段纯化回收试剂盒 ( 离心法 )1次运输Alpha Manase(Mouse Alpha mannosidase) ELISA Kit 小鼠α甘露糖苷酶Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-Phospho-HER4 (Tyr984) /FITC 荧光素标记磷酸化HER4抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DOK6 胞浆接头蛋白Dok6抗体 规格 0.2ml
IL-1 Beta (Rabbit Interleukin 1 Beta) ELISA Kit 兔白介素1β 96T
sLOX 1 英文名称: 可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1抗体 0.2ml
AES 英文名称: gp130结合蛋白GAM抗体 0.2ml
Anti-Phospho-HER4 (Tyr984) /FITC 荧光素标记磷酸化HER4抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
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