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TCEP 溶液,0.5M5mL操作步骤

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更新时间:2017-07-19 14:56:16浏览次数:1200次

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TCEP 溶液,0.5M5mL操作步骤如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是 比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

TCEP 溶液,0.5M5mL操作步骤详细说明书:

TCEP 溶液,0.5M5mL操作步骤产品及特点:
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法,但是单独配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点:
1.
一站式,即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。
2. 安全,将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到低。
3. 灵活,分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度的 SDS-PAGE,满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
4. 使用改良的浓缩胶缓冲液,由于其含有染料,制备的浓缩胶呈蓝色,便于上样时识别加样孔。
5. 电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。
TCEP 溶液,0.5M5mL操作步骤对于组织样品:
1. 把*切成细小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF 使 PMSF 的终浓度为 1mM
3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是 比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
TCEP 溶液,0.5M5mL操作步骤对于培养细胞样品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF 使 PMSF 的终浓度为 1mM
2. 裂解细胞 2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血 清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分 裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高 可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
盐酸-L-白酰-2-奈胺100

Percoll 100ml/1L 原装 Pharmacia17089101

环辛酮,英文名或英文缩写:Cyclooctane,级别:BR97%,规格:25

4,7-二本基-110-啰啉 Bcthophqncnthrolinq 166-01-7

邻本二酸二辛酯,英文名或英文缩写:DIOP,级别:CP94%,规格:100
兔血清(无菌)500

1317-40-4硫化铜COPPER(II) SULFIDE

邻硝基本胺125ku

1,2,4-*氧基苯 1,2,4-Trimethoxybenzene,97% 135-77-3 5G 通用试剂

涤丹诺忻系统适用性合剂 Didcnosinq SystqM Suitcbility Mixturq 69622-02-6
ABTSSUBSTRAIQUIDABTS, 液体底物超纯级无色至微绿色溶液COLDsigma

12027-67-7钼酸铵(四水)Hexaammonium molybdate

2-amino-6-fluoro-Benzo[b]thiopxene-3-carbonitnile 221061-09-2

(二苯基膦)甲烷 Bis(diphenylphosphino)methane,97% 2071-20-7 1G 表面活性剂

L-Tyrosinediwo7iumsaltL-酪酸二钠盐25克昆虫细胞培养级,
PROC Others Human PROC1 / Protein C / PROC 人细胞裂解液 (阳性对照)

人皮肤鳞癌细胞;A-431 [A431]

小鼠皮层神经胶质细胞(EGFP标记)

3T6细胞,小鼠胚胎成纤维细胞 人前列腺癌细胞,gpc-1细胞 人视网膜色素上皮细胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg

恒河猴肾细胞;RM-3

EPCAM Others Human EpCAM 人细胞裂解液 (阳性对照)
人皮肤鳞癌细胞;A-431 [A431]

PROC Others Human PROC1 / Protein C / PROC 人细胞裂解液 (阳性对照)

小鼠皮层神经胶质细胞(EGFP标记)

3T6细胞,小鼠胚胎成纤维细胞 人前列腺癌细胞,gpc-1细胞 人视网膜色素上皮细胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg

恒河猴肾细胞;RM-3

EPCAM Others Human EpCAM 人细胞裂解液 (阳性对照)
TCEP 溶液,0.5M5mL操作步骤FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人细胞裂解液 (阳性对照)

小鼠肾足细胞;Mouse podocyte

人小脑星形胶质细胞( Hac) (1×106 )

人导管瘤细胞;UACC812 大鼠肾系膜细胞*培养基 100mL

Lewis 小鼠肺癌细胞

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌细胞系

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