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ATCC细胞库介绍及其使用方法

时间:2023/5/29阅读:899
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ATCC细胞库介绍:

ATCC(美国模式菌种收集中心),又称为美国菌种保藏中心, 是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的,非赢利性组织,可提供各种动植物细胞、标准品、菌株达两万多种。ATCC的创立源于1925年某科学委员会意识到,科学研究对于微生物的需求增大,从而萌发了一个想法:创建一个微生物相关制品供应中心。至今,ATCC向世界各地的政府、企业、科研机构提供生物制品、技术支持和培训,成为了一个以非盈利为目的的全球性质的生物资源中心。ATCC拥有目前世界上zui大的、品种zui丰富的微生物、细胞系以及重组DNA原料,同时它也是科研工作者gogn ren的提供shijieji的可靠的研究材料的供应商。

ATCC细胞的使用方法:

1、细胞收到后的操作方法:

  取25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或隔夜,以稳定细胞状态。然后,用75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,收集瓶内液体于50ml离心管中,1000rpm离心5min,弃上清,用6ml细胞培养基重悬,全部接种到25cm2培养瓶中,再放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。如果离心后细胞量很多,可以直接1:2分瓶培养。

2、细胞传代:

细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时,收集瓶内液体于15ml离心管中,1000rpm离5min,弃上清,用12ml细胞培养基重悬细胞,按1:2的比例进行接种传代,接种到25cm2培养瓶中,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养,2-3天更换培养液。  

3、细胞冻存:

a、细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时,收集瓶内液体于15ml离心管中,1000rpm离心5min,弃上清,用适当量的冻存液(基础培养基:FBS:DMSO=5:4:1)重悬细胞,并放置于冻存管中。

b、先将细胞冻存管放置于4℃0.5h,再放置于-20℃1.5h,然后将其移入-80℃隔夜,24h后可转入液氮中进行长期保存。

4、细胞复苏:

a、从液氮中取出细胞冻存管,快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。

b、将冻存管中的细胞移至含有5ml细胞培养液的15ml离心管中,然后1000rpm/min,离心5min。

c、弃上清,沉淀细胞用6ml细胞培养基重悬,接种到培养瓶中,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。

d、第二天,换用新鲜细胞培养基继续培养。


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