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PCR是怎样完成扩增的呢?PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),实验过程是利用一段DNA为模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物的共同参与下,将该段DNA扩增至足够的数量,以便进行结构和功能的分析。
若我们想要分析/探索基因的遗传信息,则需要大量的DNA片段,例如动物的组织;凶手的毛发、血液、皮肤;古生物;历史残骸;患者的组织等,可能只能分离出少量的DNA,若想研究其遗传信息,有着很大的阻碍和困难,在1985年,出现了一种方法:可以在短时间内大量复制DNA片段,此方法为PCR,它能将很微量的遗传物质在数小时内扩增数百倍达到检测水平,那么PCR是怎样完成扩增的呢? 让我们来一起学习一下吧!
1.高温变性
变性的目的是使模板DNA双链解旋成为单链以便与引物结合。此步骤将溶液加热至94-98C并保持20-30秒,破坏两条链之间的氢键并生成单链 DNA 分子;同时也激活了DNA 聚合酶,该步骤的时间取决于所使用的聚合酶。
2.低温退火
退火温度取决于所用引物的Tm,一般比引物Tm低3-5C左右。该步骤将持续约 20-40 秒,当反应温度隆低到50-65C时,引物与互补的DNA单链序列形成氢键,DNA聚合酶会结合至引物-模板双链处开始DNA合成。
3.中温延伸
延伸时间取决于目的DNA片段的长度和DNA聚合酶的合成能力。一般而言DNA聚合酶每60秒能够合成1kb长度的DNA。DNA模板-引物结合物在Taq DNA聚合酶的作用下,沿着5’一3’的方向合成一条与模板DNA链互补的链。延伸时的温度通常为72C。
以上就是关于PCR是怎样完成扩增的问题解答,如果有更多关于PCR技术的问题,欢迎大家给小编留言~
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